Pufrovací roztoky odolávají změnám pH, protože obsahují slabé acidobazické konjugáty, které neutralizují ionty H + a OH-. Pufrovací roztoky se skládají ze slabých kyselin nebo zásad a soli této kyseliny nebo zásady. Výběr vhodného pufrovacího systému závisí na rozsahu pH pro pufrování. Většina biologických reakcí probíhá při rozmezí pH 6 až 8. Fosfátové pufry pufrují v rozmezí pH 6,5 až 7,5. Pufry karboxylové kyseliny jsou užitečné od pH 3 do 6. Boritanové pufry fungují od pH 8,5 do 10. Aminokyselinové pufry, jako je glycin a histidin, působí v různých rozmezích pH. Pufr Tris je jedním z nejčastěji používaných pufrovacích systémů v biologických laboratořích. V následujícím příkladu budou použity výpočty pro Tris pufrovací roztok, ale metodika platí pro jakékoli pufrovací řešení.
K určení požadovaných molů báze použijte produkt výsledné molarity a objemu roztoku. Například pokud jsou potřeba 2 litry 0,1 M roztoku Tris pufru, pak je požadovaný počet molů Tris:
Vypočítejte požadovanou hmotnost pufru vynásobením počtu potřebných molů molekulovou hmotností báze. Například hmotnost 0,2 molu Trisovy báze se rovná:
Rozpusťte základnu v destilované vodě pomocí magnetické míchací tyčinky a míchací varné desky. Rozpusťte jej v objemu vody jen o málo menším, než je konečný objem roztoku (950 až 975 ml na každý litr konečného roztoku). Hodnota pH pufru Tris se mění s koncentrací a je-li použit příliš malý počáteční objem, je třeba jej upravit. Nejlepší je také připravit pufr při stejné teplotě, která se použije během testu nebo experimentu, protože Tris má velké změny pH v závislosti na teplotě.
Tipy
- Chcete-li ušetřit čas při přípravě pufrovacího roztoku, můžete použít předem připravené koncentráty pufru při požadovaném pH a zředit na požadovanou molaritu a objem. Připravte pufrovací roztok při stejné teplotě, která bude použita, aby se zabránilo významným změnám pH. Vyvarujte se časově náročné úpravy pH, titrujte až po naředění na požadovanou koncentraci. Rozpuštění v příliš malém objemu povede k opakovaným titracím.
Varování
- Při zacházení s kyselinami a zásadami buďte opatrní. Noste ochranné brýle.
o autorovi
Carla Boulianne je evoluční biologka školením a spisovatelkou na volné noze vášní. Kromě psaní pro Demand Studios a eHow je autorkou funkcí pro Rodičovství nadaného dítěte na Suite101.com. Vzrušuje jí objevování nových témat prostřednictvím rozsáhlého výzkumu.
Fotografické kredity
Foto s laskavým svolením Emmi P. @ morgueFile.com