Химиците използват високоефективна течна хроматография или HPLC за разделяне на смеси от съединения. По принцип методът се състои в инжектиране на проба в колона, където тя се смесва с един или повече разтворители. Различните съединения се адсорбират или „залепват” към колоната в различна степен; и тъй като разтворителят изтласква съединенията през колоната, един от компонентите на сместа ще излезе първи от колоната. Инструментът открива съединенията, когато излизат от колоната, и произвежда хроматограма, която се състои от график с време на задържане по оста x и интензивност на сигнала от детектора по оста y. Когато съединенията излизат от колоната, те произвеждат „пикове“ в хроматограмата. Като цяло, колкото по-отдалечени и колкото по-тесни са пиковете в хроматограмата, толкова по-висока е разделителната способност. Учените смятат, че резолюцията от 1,0 или по-висока представлява адекватно разделяне.
Измерете ширината на два съседни пика в хроматограмата, като отбележите къде стойностите на оста x са в основата на всеки пик. Оста x представлява времето на задържане, обикновено измерено в секунди. По този начин, ако пикът започва на 15,1 секунди и завършва на 18,5 секунди, неговата ширина е (18,5 - 15,1) = 3,4 секунди.
Определете времената на задържане, като отбележите времето, т.е. местоположението по оста x, което съответства на местоположенията на максимумите на пиковете. Тази стойност обикновено ще бъде около половината между двете стойности, използвани за изчисляване на ширината в стъпка 1. Примерът, даден например в стъпка 1, ще покаже максимум на около 16,8 секунди.
Изчислете разделителната способност R между два пика по:
R = \ frac {RT_1-RT_2} {0,5 (W_1 + W_2)}
където RT1 и RT2 представляват времената на задържане на пикове 1 и 2 и W1 и W2 представляват ширините на върховете, взети в основите им. Продължавайки примера от стъпки 2 и 3, един пик показва време на задържане от 16,8 секунди и ширина от 3,4 секунди. Ако вторият пик показва време на задържане от 21,4 секунди с ширина 3,6 секунди, тогава разделителната способност ще бъде:
R = \ frac {21.4-16.8} {0.5 (3.4 + 3.6)} = 1.3
Неща, от които ще се нуждаете
- HPLC хроматограма
- Калкулатор