Учените и техниците често трябва да изчисляват концентрацията на клетките в суспензия. Например, когато пациентът взема кръвта си в лекарски кабинет, лабораторията може да използва определени методи, за да търси количеството бели кръвни клетки в даден обем кръв. Това дава на лекаря много информация за здравето на нейния пациент, особено на имунната му система и дали се бори с инфекция или друго заболяване. Подобни тестове могат да търсят много други клетки в кръвта, както и гръбначна течност и други телесни течности, като например броя на сперматозоидите в спермата за целите на плодовитостта. Учените също изчисляват клетъчните концентрации на бактерии, дрожди и други микроорганизми за многобройни цели, вариращи от екологични изследвания до индустриални технологии. Една от най-често срещаните техники се преподава и в много часове по биология в колежа и използва устройство, наречено преброителна камера.
Преди клетъчната суспензия да влезе в камерата за преброяване, може да се наложи разреждане, тъй като може да съдържа хиляди или милиони клетки. В този случай клетките не могат да бъдат разумно преброени. За разреждане на пробата използвайте стерилна пипета, за да поставите десет микролитра от клетъчния разтвор в епруветка, съдържаща 90 микролитра разредител. Типът на разредителя ще зависи от вида на клетката. Разбъркайте го добре. Сега този разтвор е десет пъти по-разреден от първоначалната проба, така че коефициентът му на разреждане е 10
-1. Етикетирайте го. Повторете това няколко пъти, като всеки път използвате стерилна пипета, докато разтворът се разреди достатъчно. Ако сте го разреждали втори път, втората епруветка е била 100 пъти по-разредена от първоначалния разтвор, така че коефициентът на разреждане е 10-2 и така нататък.Може да се наложи да опитате няколко разреждания, за да определите точния коефициент на разреждане за преброителната камера. Камера за преброяване е всъщност много малка, ясна, правоъгълна кутия с точна дълбочина и прецизна решетка, изписана отгоре. Известен е още като хемоцитометър или понякога хемацитометър. Целта е суспензията да бъде достатъчно разредена, така че когато се гледа в камерата за броене, клетките да не се припокриват и те да се разпределят по мрежата по еднакъв начин. Пипетирайте разредената суспензия, съдържаща клетките, в ямката в преброителната камера, където тя ще се утаи в решетъчната камера чрез капилярно действие. Поставете преброителната камера на сцената на микроскопа и я разгледайте с ниска мощност.
Решетката съдържа квадрати, които са направени от още по-малки квадрати. Изберете приблизително четири или пет квадрата, или колкото и да са ви необходими, за да преброите поне 100 клетки, по избран от вас модел, като четирите ъгъла и централния квадрат. Ако клетките са големи, това може да са големите квадрати, но ако клетките са малки, вместо това можете да изберете по-малките квадрати.
Специфичният обем на всеки квадрат на решетката може да варира в зависимост от производителя на камерата за преброяване, но често дълбочината на камерата е 0,1 милиметри, площта на големите квадрати е 1 квадратни милиметра, а площта на по-малките квадрати е 0,04 квадратни милиметри. Тогава по-големите квадрати имат обем от 0,1 кубични милиметра. За този пример, приемете, че сте преброили общо 103 клетки на пет квадрата и че сте разредили първоначалната проба, докато коефициентът на разреждане е 10-2.
Ако всеки квадрат на мрежата има обем от 0,1 кубични милиметра и са преброени пет, тогава общият обем на камерата, която е преброена, е 0,5 кубични милиметра и има 103 клетки. Удвоено, за да стане 1 кубичен милиметър, ще стане 206 клетки. Един кубичен сантиметър е еквивалентен на 1 милилитър, което е полезно измерване за течности. В кубичен сантиметър има 1000 кубични милиметра. Следователно, ако имаше кубичен сантиметър или милилитър суспензия, щяхте да преброите 206 000 (206 х 1000) клетки. Ето как изглежда уравнението:
Обем на квадрата на мрежата × брой преброени квадрати = общ обем на преброеното окачване
Брой клетки ÷ обем на преброената суспензия = брой клетки на милиметри на куб
Брой клетки на милиметри в куб × 1000 = брой клетки на милилитър
Ще трябва да отчетете всяко разреждане, извършено, за да направите първоначалния разтвор под микроскоп. В този пример коефициентът на разреждане е 10-2. За да се изчисли първоначалната концентрация на разтвора:
Брой клетки на милилитър ÷ фактор на разреждане = Клетъчна концентрация
В този пример броят на клетките на милилитър е 206 000 и разделя това на 10-2 (0,01) дава клетъчна концентрация от 20 600 000 клетки на милилитър в първоначалната проба.
