Учените използват поточна цитометрия, за да разграничат различните видове клетки или микроскопични организми. Това е инструмент, използван в много приложения като медицинска диагностика или съдебна патология. Въпреки че тази експериментална техника е доста лесна за изпълнение, се получава анализ на сложните данни от поточния цитометър е по-трудно поради множеството експериментални фактори и / или цитометър параметри. Поради това е рутинно цитометричните данни да се визуализират и анализират с помощта на сложни професионални програми като CELLQuest или FlowJo. Познаването на техниките, машините и софтуера на поточната цитометрия е необходимо, за да се разберат резултатите, получени от тях експерименти.
Изяснете целта на експеримента, като попитате: „Какъв беше въпросът или хипотезата, която се изследва?“ Това ще бъде необходими за адаптиране на суровите резултати към подходящия формат и настройки за по-нататъшен анализ, използвайки статистическа цитометрия софтуер. Направете необходимите промени, за да се покажат данните със съответните настройки (напр. Положителни клетки, отрицателни портали, интензивност на флуоресценция, клетъчни популации и т.н.).
Намери порти. Клетките могат да бъдат групирани или просто наблюдавани групирани заедно в графика на плътност или контурна диаграма. Групите често се разделят в зависимост от тяхната идентичност. Ако една група оцветява много интензивно за даден маркер или антитяло, се стига до заключението, че всички членове на тази група имат идентичността на специфичния клетъчен тип, който изразява този маркер. Обикновено се срещат клетки, които са положителни за повече от един от тези маркери и тези клетки обикновено са междинен продукт и се означават като „двойно положителни“.
Погледнете скатерграфиите. Начинът, по който групите клетки се разпространяват в разпръснат график, е индикация за размера на клетките. Клетките с много големи или големи разсейки обикновено са големи клетки; те обаче могат да бъдат големи, просто защото съдържат голям дял от цитоплазмата, или могат да бъдат високи, защото имат много голямо ядро. В зависимост от биологията, която се изследва, това, разбира се, ще варира значително в различните експерименти.
Погледнете числата. Настройте графиките, за да показват различни параметри на една ос (обикновено оста X), като същевременно отчитате броя на оста Y. Това показва дела на популацията от извадката, които са положителни за конкретния параметър, като a пик обикновено се наблюдава в положително оцветена проба, която няма в отрицателната контрола проба.
Погледнете хистограмите с множество параметри. Чрез регулиране на оста X и оста Y на всяка представлява различен параметър, който е бил изследвани по време на експеримента, е възможно да се получи по-задълбочено разбиране на свойствата от пробата. Например, чрез задаване на оста X на червена флуоресценция и оста Y на зелена флуоресценция, портите в квадрантен стил могат да бъдат изчислени за проба, за да покаже четири области на квадрант, в които клетките присъстват и са оцветени за червена или зелена флуоресценция, и двата цвята, или нито една при всичко. Това позволява хетерогенна извадка да бъде разделена на съставните й части и всички припокриващи се обекти да бъдат визуализирани, както и количествено определени.
Препратки
- „Анализ на данните на поточната цитометрия“; Сюзън Шарроу; 1991
- „Поточна цитометрия: инструментариум и анализ на данни“; Марвин Ван Дила; 1985
- „Протоколи за поточна цитометрия“; Тереза и Робърт Хоули; 2004
за автора
Палмър Оуюнг е магистър по международен бизнес от Калифорнийския университет в Сан Диего и Бакалавър по социология от Калифорнийския университет в Санта Барбара и е обучен молекуляр биолог. От 2006 г. е писател на свободна практика. В допълнение към писането, той е редовен търговец на Forex и интернет маркетинг.
Снимки Кредити
Полка точка RF / Полка точка / Гети изображения