Western blot, аналитична техника, използвана за точно определяне на специфичен протеин в дадена проба, използва способността на ензим или маркирано с флуоресценция първично антитяло да се свързва със специфичния му антиген. Това е тристепенен процес, започващ с гел електрофореза, последван от мембранно попиване и сондиране с антитела. Откриването на протеини може да бъде пряко или косвено, като последното използва белязано вторично антитяло, насочено срещу първичния. Въпреки че е приет като рутинна техника за анализ на протеини, Western blot има както ограничения, така и предимства.
Предимство: Чувствителност
Един от най-големите аргументи в полза на Western blot е неговата чувствителност. Поради способността си да открива само 0,1 нанограма протеин в проба, техниката теоретично може да служи като ефикасен инструмент за ранна диагностика, усещащ и най-малкия имуногенен отговор от вирус или бактерия при пациент проба. Непрякото уестърн блот допълнително надгражда тази чувствителност от способността на вторичното антитяло да усилва интензивността на сигнала, открит от системата за изображения. По-голямата чувствителност означава, че са необходими по-малко антитела за тестване, което значително намалява лабораторните разходи.
Предимство: Специфичност
Уестърн блот техниката дължи своята специфичност на два големи фактора, допринасящи за това. Първо, гел електрофорезата сортира проба в протеини с различен размер, заряд и конформация. Този процес сам по себе си е огромна стъпка към откриване, тъй като ивиците, образувани в гела, вече дават улики за размера на протеина или полипептида от интерес. Специфичността на взаимодействието антитяло-антиген служи като втори голям фактор. Тъй като специфичните антитела показват афинитет към специфични протеини, процесът може селективно да открива целеви протеин дори в смес от 300 000 различни протеина.
Недостатък: Склонност към фалшиви или субективни резултати
Въпреки своята чувствителност и специфичност, уестърн петно все още може да доведе до грешни резултати. Фалшиво положителен резултат, когато антитялото реагира с непредвиден протеин, което е често се случва, когато пациентът, тестван за ХИВ, има туберкулоза или редица паразитни инфекции. Фалшиво отрицателен, от друга страна, може лесно да се получи, ако на по-големите протеини не се даде достатъчно време, за да се прехвърлят правилно в мембраната. Неправилното попиване и обработка често водят до изкривени, избледнели или дори множество ленти, което прави резултатите от теста подчинени на интерпретацията на техника.
Недостатък: Висока цена и техническо търсене
Цената на вестерн-блот е съставна част от големите индивидуални разходи за маркирани антитела, опитни анализатори и лабораторно оборудване. Деликатен процес, Western blot изисква прецизност във всяка стъпка за правилно идентифициране на съставните части на пробата. Малка грешка в концентрацията на реагента или в инкубационния период може да бъде пагубна за целия процес. И накрая, оборудването, необходимо за откриване и изобразяване - хемилуминесцентни, флуоресцентни, радиоактивни или лазерни системи за откриване - може да бъде твърде скъпо за средното микробиологично звено.