Изчисляването на титъра за вирус е сложен начин да се каже, че учен брои броя на вирусите в определена проба. За да изчислят титрите на вируса, учените заразяват плочи с растящи бактерии с вирусни разтвори при различни концентрации и разберете броя на вирусите в оригиналния разтвор, като преброите бактериите, които са умрели поради вируса инфекция.
Сложете ръкавици, напълнете 10 епруветки за култивиране с 9 ml бульон и ги маркирайте с „10 ^ -1“, „10 ^ -2“, „10 ^ -3“ и така до „10 ^ -10.“ Тези епруветки ще се използват за вирусни серийни разреждания, използвани за изчисляване на фага титър. Тъй като вирусите могат да нараснат до невероятно високи концентрации, трябва да ги разреждате, за да ги преброите ефективно. Всяка епруветка представлява десеткратно разреждане на вируса.
Вземете 1 ml от смесената култура от вашата епруветка с надпис „10 ^ -1” и я прехвърлете с нова пипета в следващата епруветка с надпис „10 ^ -2”. Смесете и тази епруветка.
Продължете този модел, за да създадете серийна серия от разреждания. В крайна сметка ще получите 9 туби от 9 ml и 1 туба от 10 ml. Вирусните натоварвания във вашите епруветки ще се разреждат от 10 пъти (първата ви тръба) или 100 пъти (втората ви тръба) до десет милиарда пъти (последната ви тръба).
Добавете две капки бактериална култура към вашия агар и го разбъркайте внимателно. Това са бактериите, които ще бъдат унищожени, което ви позволява да преброите броя на вирусни частици в определен разтвор.
Добавете 1 ml от всяко серийно разреждане към съответната му агарова тръба, докато епруветките са все още в банята с гореща вода. Например 1 ml от вашето 10 ^ -1 серийно разреждане трябва да влезе в агаровата тръба с надпис „10 ^ -1“.
Смесете всяка епруветка и след това изсипете всяка епруветка в пластината на Петри със съответния етикет. Това ще създаде тънък слой агар, който е инокулиран с бактерии и вируси във всяка плоча. Оставете плочите да растат за една нощ в инкубатор.
Извадете чиниите си от инкубатора и ги прегледайте. Трябва да видите облачни области в цялата плоча, където са се развили бактерии, с изключение на малки чисти петна, наречени плаки. Тези плаки са петна от мъртви бактерии и всяка плака представлява един вирус.
Вземете броя на плаките в чинията си и умножете по 10. Ако преброите 157 плакета, ще получите 1570.
Умножете числото, което сте получили в предишната стъпка, по обратното на числото на вашата тръба за разреждане. Например, ако избраната от вас плоча е 10 ^ -5, ще умножите 1570 по 10 ^ 5, за да получите 157000000. Това окончателно число е вашият фагов титър и представлява броя на вирусите на ml от вашата оригинална култура.