Гелната електрофореза е един от основните методи, използвани в молекулярната биология за анализ на ДНК. Този метод включва миграция на фрагменти от ДНК през гел, където те се разделят въз основа на размера или формата. Дори и научно обоснован метод като гел електрофорезата обаче не е имунизиран срещу грешки.
Как работи електрофорезата
•••Jezperklauzen / iStock / Getty Images
Гелната електрофореза включва използването на гел, обикновено направен от полимери като агароза. Гелът се потапя в буферен разтвор, който провежда електрическо поле. ДНК пробата, която представлява интерес, първо се фрагментира с помощта на рестрикционни ензими и след това се инжектира в гела. Когато електрическото поле е включено, фрагментите на ДНК в гела мигрират към положителния електрод. Ако ДНК фрагментите са с различни размери, тогава времената на миграция ще бъдат различни за всеки фрагмент с размер. След това фрагментите се визуализират с помощта на багрило или авторадиография и се виждат като ленти в гела.
Замърсяване на пробата
•••aiaikawa / iStock / Getty Images
Основното приложение на електрофорезата е като инструмент за анализ на ДНК в молекулярната биология, но се използва и в криминалистиката като средство за идентифициране на проби от местопрестъплението. Важно е източниците на грешки в тази техника да бъдат сведени до минимум, за да се получат точни резултати. Един източник на грешка е замърсяването на ДНК пробата. Ако в пробата има чужда ДНК, гелът ще има повече ленти, отколкото би могъл да бъде намерен в гел, който съдържа само пречистената проба.
Проблеми с гела, тока и буфера
•••IndiaImages / iStock / Getty Images
Концентрацията на гела също трябва да е правилна, за да се избегнат грешки. Ако концентрацията е твърде висока или твърде ниска, фрагментите ще мигрират или твърде бавно, или твърде бързо. Това ще доведе до грешки при разрешаването на различните ленти. По време на електрофорезата трябва да се внимава напрежението да е стабилно. Всякакви колебания в напрежението ще доведат до нестабилна миграция на ДНК фрагменти, което ще доведе до грешки при отчитане на лентите. Буферният разтвор също трябва да бъде с правилния състав, тъй като буферът с грешно рН или йонна концентрация ще промени формата на ДНК фрагментите, променяйки и времето им на миграция.
Правилна визуализация
•••Ingram Publishing / Ingram Publishing / Getty Images
Най-важното е, че гелът трябва да се визуализира правилно. Ако концентрацията на багрилото или радиоактивната сонда, използвана за визуализиране на пробите, е твърде висока, полученото изображение ще бъде много разхвърляно, тъй като остатъчните фрагменти също ще бъдат визуализирани. Ако концентрацията на гел е твърде ниска, няма да има визуализация. Когато през всички етапи се следват правилните процеси, гел електрофорезата ще даде точни резултати и може да се използва с голяма увереност. Както при всички научни процедури, гел електрофорезата може да бъде склонна към грешки, но те могат да бъдат сведени до минимум при подходяща подготовка и работа.