Вашият учител ви дава проба от бактерии и ви пита: Колко жизнеспособни микроорганизми има в тази проба? Какво означава това и как го разбираш? Един метод е чрез намиране на броя на единици за образуване на колонии(CFU).
Какво представляват CFU?
CFU се отнася до броя на отделните колонии на който и да е микроорганизъм, които растат на плоча от среда. Тази стойност от своя страна представлява броя на бактериите, способни да се размножават, тъй като са образували колонии на плочата. Съществува формула за CFU, която включва вземане на проби.
Как да намерите CFU?
Преброяването на броя на бактериите в течна проба е много трудно. Има твърде много от тях и те са твърде малки. Освен това, някои от тях може да са мъртви, а други живи и мъртвите не трябва да се броят към общата сума. Вие се интересувате само от жизнеспособен бактерии или бактерии, които могат да се репликират. И така, как можете да разберете колко бактерии имате?
По същия начин, по който можете да вземете анкета от 1000 души и да я приложите към 10 000 души, за да разберете как биха могли да мислят по дадена тема. Можете да опитате да вземете малка част от оригиналната си проба, да разберете колко бактерии има тази част и след това изчислете, за да определите приблизително колко биха могли да са в оригинала проба.
Използване на разреждания за намиране на CFU
Процедурата за намиране на CFU на дадена проба включва първо разреждане на тази проба. След това разрежданията се поставят върху плочи с правилната среда за растеж. Многократните разреждания често са добра идея, тъй като оригиналната проба може да бъде много концентрирана.
След като оставите бактериите да растат върху плочите за определен период от време, отделни колонии се броят на чиния. Ако пробата е била твърде концентрирана, тогава вместо отделни колонии ще видите голяма площ, покрита с бактериален растеж, която се нарича a морава. Това означава, че трябва допълнително да разреждате пробата си и да опитате да растете отново, така че да можете да видите отделни колонии.
Тъй като отделните колонии идват от една бактерия, която се възпроизвежда многократно, само те се броят за CFU.
Експериментална процедура за намиране на CFU
Пример за използване на разреждания за изчисляване на CFU може да бъде както следва: Първо, от първоначалната проба, която ви дава учителят, вземате 1 ml и я поставяте в чиния. На следващия ден виждате, че има морава от бактерии. Това означава, че не можете да преброите броя на CFU. Следващата стъпка е правенето на някои разреждания.
Първо, вземате 1 ml проба и я разреждате в 9 ml течна среда. Тъй като разреждането представлява проба от една част към девет части разредител, тя се нарича разреждане 1:10. След това вземете 1 ml от разреждането 1:10 и добавете това към 9 ml течна среда. Това разреждане е разреждане 1: 100. Накрая правите разреждане 1: 1000, като вземате 1 ml от разреждането 1: 100 и добавяте 9 ml течна среда. За всяко разреждане вече имате 10 ml разредена бактериална култура.
Направени разреждания, поставяте 0,5 ml от разрежданията върху плочи. Не забравяйте да етикетирате плочите, с които е било покрито разреждането.
На следващия ден се връщате и виждате, че на всички плочи има отделни колонии. Искате да изберете чиния между 30 и 300 колонии. Виждате, че плаката за разреждане 1: 1000 има около 10 колонии, така че това означава, че сте преразредили пробата. Тази табела няма да бъде полезна при намирането на CFU.
Плаката за разреждане 1:10 има много колонии, може би повече от 300. В този случай можете да отидете на табела 1: 100. Броите колониите на тази плоча и откривате, че тя има 179 колонии. Това означава, че 0,5 ml от разреждането 1: 100 съдържа 179 CFU. Но какво ще кажете за оригиналната проба?
Какво е изчисление на CFU?
След като разполагате с някои данни, можете да направите изчислението на CFU в оригиналната извадка.
1. Вземете количеството, което сте поставили (0,5 ml) и умножете по коефициента на разреждане (0,01), за да получите 0,005. Трябва да направите това, за да намерите коефициента на разреждане, който е дал броя на CFU. Тук половин милилитър от разреждането 1: 100 ви позволи да преброите CFU.
2. Разделете CFU от разреждането (179) с резултата от стъпка 1 (0.005), за да получите 35 800 CFU.
Това означава, че оригиналният 1 ml проба, която е разредена, съдържа 35 800 CFU. Друг начин да се изрази това е да се каже, че оригиналната проба има 35 800 CFU / ml.
CFU е чудесен инструмент за откриване на това колко бактерии, гъбички или каквито и да било микроорганизми има в дадена проба. Методът за покритие, описан тук, е особено полезен за много концентрирани проби или организми, които не растат добре в течна култура.