По време на тънкослойна хроматография техникът поставя петна от химическа смес върху плоска плоча, покрита със слой абсорбиращ материал, след което поставя долната част на плочата в разтворител. Тъй като разтворителят се придвижва нагоре по плочата, химикалите в сместа се придвижват заедно с него с различна скорост, така че те се разделят. Този тест определя кои химикали са в смес, като сравнява скоростта на пътуване на неизвестни с известните стандарти. Резултатите обаче могат да бъдат повлияни от много фактори.
TL; DR (твърде дълго; Не прочетох)
Стойностите на коефициента на задържане в тънкослойната хроматография се влияят от абсорбента, разтворителя, самата хроматографска плака, техниката на нанасяне и температурата на разтворителя и плаката.
Фактори на задържане
Коефициентът на задържане на даден химикал по време на тънкослойна хроматография е мярка за това колко далеч той се движи нагоре по плаката в отговор на движението на разтворителя. Тъй като абсолютното движение на химикала зависи от това докъде се движи разтворителят, вие изчислявате стойностите на коефициента на задържане спрямо степента на движение на разтворителя. Коефициентът на задържане за химикал е вертикалното разстояние, преместено от химикала от мястото, където е било първоначално нанесено върху плочата, разделено на изминатото разстояние от разтворителя - измерено от същото начало точка.
Тънкослойна хроматографска плоча
Самата тънкослойна хроматографска плака може да повлияе на стойността на коефициента на задържане, получена за даден химикал. Тънкослойните хроматографски плочи могат да бъдат покрити с различни абсорбиращи твърди вещества; най-често силициев диоксид или алуминиев триоксид. Тъй като коефициентът на задържане се основава на относителния афинитет на химикала към абсорбента в сравнение с разтворителя, промяната на абсорбента може значително да промени фактора на задържане. Също така дебелината и еднородността на слоя абсорбент може да варира от плоча до плоча, особено ако те са ръчно изработени. Тези фактори могат също да променят стойността на коефициента на задържане за химикалите.
Фактори за задържане на въздействието на разтворителя
Тъй като разтворителят носи химикала нагоре по плочата, конкретният използван разтворител също ще окаже значително влияние върху стойността на коефициента на задържане на химикала. Разтворител, който има по-силно взаимодействие за определен химикал, ще преодолее по-лесно всеки афинитет на химикала към абсорбиращия слой и го преместете по-далеч за даден период от време. Смесите от разтворители също могат да имат различни ефекти в зависимост от дела на всеки разтворител.
Други фактори
Има няколко други фактора, които могат да повлияят на фактора на задържане в някои случаи. Температурата на разтворителя и плочата може да направи леки промени, тъй като например разтворителят често може по-добре да разтвори химикалите, които транспортира при по-високи температури. Техниката на техника при нанасяне на пробата върху плочата може също да промени фактора на задържане. Прилагането на твърде много проба може да доведе до големи, дифузни ленти от химикали, които се движат нагоре по плочата, което затруднява точното измерване на разстоянието, транспортирано от химикала.