Висококачествената течна хроматография е техника за лабораторен анализ на смес. Това е ефективен тип хроматография, който използва високо налягане, а не просто гравитация, за да прокара проба от смес през колона. Пробата се инжектира, след което помпа, съдържаща голямо количество налягане, помага да се премести пробата по напълнена колона, където тя се разделя на отделни компоненти. След това това разделяне се анализира с детектор, за да се получат резултати.
Място за инжектиране
За да се инжектира в HPLC, пробата първо трябва да се разтвори в полярен течен разтворител, за предпочитане такъв с известни HPLC спектри, така че данните му да могат да бъдат разграничени от пробите. Течният разтвор, съдържащ пробата, се поставя в инструмента и се изпраща в колоната. Действителното местоположение на мястото на инжектиране зависи от марката инструменти. В повечето случаи процесът на инжектиране е автоматизиран, но в някои случаи лабораторен работник трябва да инжектира пробата с помощта на малка игла на спринцовка.
Компонент на помпата
Компонентът на помпата на HPLC устройството е необходим, тъй като осигурява налягането, което задвижва пробата през колоната. Силата на помпата варира, но мощната може да предизвика налягане до 6000 psi или лири на квадратен инч, което се прилага след инжектиране на пробата. Това позволява пробата да премине през колоната по-бързо и ефективно, отколкото ако капе чрез използване само на силата на гравитацията.
Описание на колона
Увеличената скорост на пробата, преминала през колоната от помпа, позволява използването на различен тип колона от тези, използвани при обикновена течна хроматография. Опаковъчният материал в колоната може да има много по-малък размер на частиците, което увеличава повърхността и следователно подпомага взаимодействието на пробата с колоната. Повечето HPLC колони работят чрез полярност. Пробата се разтваря в полярен разтворител и колоната се състои от предимно неполярни въглеводороди. Полярните части на молекулата на пробата преминават много бързо през колоната, защото те взаимодействат предимно с разтворител, докато неполярните компоненти на пробата се задържат в колоната, образувайки слаби взаимодействия с колоната компоненти. Следователно компонентите на пробата излизат от колоната в ред от най-полярна до най-неполярна.
Функция на детектора
Детекторите също варират в зависимост от вида на използвания HPLC инструмент. Повечето обаче функционират по същия основен начин. Източник на ултравиолетова светлина свети върху отделените компоненти на пробата, когато те излизат от колоната. Повечето органични съединения абсорбират определено количество светлина, така че когато преминават покрай приложения светлинен лъч, детекторът може да вземе колко светлина се абсорбира. Детекторът също така записва времето на задържане на компонентите въз основа на реда, в който те излизат от колоната. След това този изход може да се анализира въз основа на площта на пика, за да се определи точното естество на компонентите на пробата.
