كيف تقرأ الهلام الكهربائي

الرحلان الكهربائي للهلام هو طريقة تستخدم في المختبرات للفصل الحمض النووي (حمض النووي الريبي منقوص الأكسجين). يمكن استخدامه أيضًا لفصل الحمض النووي الريبي والبروتينات.

تسمح قراءة نتائج الفصل الكهربائي للهلام للباحثين بتحديد حجم الخيوط في العينة. لفهم كيفية عمل العملية ، يجب أن يتعلم المرء أولاً تعريف الهلام الكهربائي.

الهلام الكهربائي هو أداة قوية تستخدم في البيولوجيا الجزيئية لتحديد الحجم والشحنة الكهربائية للحمض النووي DNA و RNA والبروتينات. تبدأ باستخدام قطع من الحمض النووي تم هضمها بواسطة إنزيمات مأخوذة من خيط أكبر من الحمض النووي.

باستخدام شدة نطاق الرحلان الكهربائي للهلام كنتائج ، يمكنك معرفة حجم الأجزاء. يمكن للمرء بعد ذلك الحصول على ملف بصمة الحمض النووي.

كما يكشف الجزء "الكهربائي" من الكلمة ، أ تعريف هلام التفريد يستلزم استخدام مجال كهربائي. يتم استخدام آلة خاصة تحتوي على محلول عازل يغطي الأقطاب الكهربائية ، وبئر لتعليق الجل من الداخل والأقطاب الكهربائية نفسها.

هلام الكهربائي يتطلب استخدام مادة هلامية مكونة في لوح مصنوع عادة من نسخة مطهرة من أجار من أعشاب بحرية تسمى agarose.

الاغاروز الهلام صنع مصفوفة مسامية يمكن من خلالها للجزيئات المشحونة ذات الأحجام المختلفة أن تنتقل بسرعات مختلفة. يتم إضافة مادة كيميائية تسمى بروميد إيثيديوم (EtBr) إلى محلول الهلام قبل صبها في قالب.

إذا كان لديك DNA أو جزيئات بروتين صغيرة جدًا لتفصلها ، فقد تحتاج إلى استخدام ملف هلام بولي أكريلاميد بدلا من الاغاروز. انتبه عند استخدام بولي أكريلاميد ، لأنه مادة سامة للأعصاب.

يتم وضع مشط خاص في قالب هلام الاغاروز ، ثم يتم إزالته بعناية بعد أن يتجمد. هذا هو المكان الذي يتم فيه وضع جزء الحمض النووي أو العينات الجزيئية الأخرى ، بعد خلطها أولاً بصبغة تحميل خاصة. ال صبغ التحميل هو فقط لتتبع حركة الحمض النووي ، لأنه غير مرئي بطريقة أخرى.

يوجد أيضًا بئر يحتوي على ما يسمى ب سلم الحمض النووي أو علامة. يعمل هذا كقالب عالي الجودة بأحجام نطاق معروفة ، لمقارنة الحجم بعينات الحمض النووي قيد الدراسة. بمجرد تطبيق المجال الكهربائي ، ستنتقل هذه الجزيئات سالبة الشحنة عبر الهلام باتجاه النهاية الإيجابية.

بمجرد انتقال الجزيئات إلى نهاية الهلام ، حان وقت القراءة نتائج الرحلان الكهربائي للهلام. ترتبط صبغة EtBr الموجودة في الجل بالحمض النووي بسهولة ، ومن ثم يتم استخدامها ، وبعد ذلك يمكنك رؤية مجموعات من الحمض النووي تتألق تحت ضوء الأشعة فوق البنفسجية.

يجب أن تحرص بشدة على عدم لمس بروميد الإيثيديوم ، لأن تقاربه مع الحمض النووي يعني أيضًا أنه يمكن فكه ؛ لذلك يعتبر مطفرا. تتوفر الآن أصباغ أحدث وأكثر أمانًا ، على الرغم من أن أسعارها أعلى.

يكشف ضوء الأشعة فوق البنفسجية عن شدة نطاق الرحلان الكهربائي للهلام للحمض النووي أو العينات الجزيئية الأخرى. يكشف موقع العصابات على هلام عن حجم جزء الحمض النووي. ال كثافة الفرقة الكهربائي للهلام يكشف عن تركيز الجزيء.

يمكنك الآن مقارنة نطاقات الحمض النووي في عيناتك بعينة سلم الحمض النووي. ستساعدك أحجام نطاق السلم المعروفة في تحديد الحجم النسبي للحمض النووي الذي تدرسه.

تم استخدام هلام التفريد في بصمات الحمض النووي والطب الشرعي. لقد ساعد الباحثين في تحديد معلومات حول جينومات العديد من الأنواع. يعد استخدام نتائج التحليل الكهربائي للهلام عالية الجودة أمرًا ضروريًا لهذه المجالات المهمة.

لذلك من الضروري العمل بمكونات عالية الجودة والاهتمام الشديد بصنع المواد الهلامية. من الضروري منع تلوث عينات الحمض النووي بالحمض النووي الريبي أو البروتينات.

تأكد من استخدام عازلة نظيفة ، صب الجل بعناية حتى تتشكل آبار المشط بالتساوي وتحافظ على جميع الكواشف في درجة الحرارة المناسبة. هلام الكهربائي يجب أن تكون شدة النطاق نابضة بالحياة ونظيفة ، مع عدم وجود آثار للحمض النووي الآخر في الخلفية ، ولا توجد مسحات من الحمض النووي الريبي أو البروتينات التي تلوث الهلام.