غالبًا ما يحتاج العلماء والفنيون إلى حساب تركيز الخلايا في التعليق. على سبيل المثال ، عندما يتم سحب دم المريض في عيادة الطبيب ، يمكن للمختبر استخدام طرق معينة للبحث عن كمية خلايا الدم البيضاء في حجم معين من الدم. هذا يعطي للطبيبة الكثير من المعلومات حول صحتها عن مريضها ، وخاصة جهازه المناعي وما إذا كان يحارب عدوى أو مرضًا آخر. يمكن أن تبحث مثل هذه الاختبارات عن العديد من الخلايا الأخرى في الدم وكذلك السائل الشوكي وسوائل الجسم الأخرى ، مثل عدد خلايا الحيوانات المنوية في السائل المنوي لأغراض الخصوبة. يحسب العلماء أيضًا تركيزات الخلايا للبكتيريا والخمائر والكائنات الدقيقة الأخرى لأغراض عديدة تتراوح من البحث البيئي إلى التقنيات الصناعية. يتم تدريس إحدى التقنيات الأكثر شيوعًا أيضًا في العديد من فصول علم الأحياء بالكلية ، وهي تستخدم جهازًا يسمى غرفة العد.
قبل أن يدخل المعلق الخلوي إلى غرفة العد ، قد يحتاج إلى تخفيف لأنه يمكن أن يحتوي على آلاف أو ملايين الخلايا. في هذه الحالة ، لا يمكن حساب الخلايا بشكل معقول. لتخفيف العينة ، استخدم ماصة معقمة لوضع عشرة ميكرولتر من محلول الخلية في أنبوب اختبار يحتوي على 90 ميكرولتر من مادة مخففة. يعتمد نوع المادة المخففة على نوع الخلية. اخلطيها جيدا. هذا المحلول الآن مخفف أكثر بعشر مرات من العينة الأولية ، لذا فإن عامل التخفيف الخاص به هو 10
-1. قم بتسمية ذلك. كرر هذا عدة مرات ، باستخدام ماصة معقمة في كل مرة ، حتى يخفف المحلول بدرجة كافية. إذا قمت بتخفيفه للمرة الثانية ، فإن أنبوب الاختبار الثاني يكون مخففًا 100 مرة أكثر من المحلول الأولي ، لذلك كان عامل التخفيف 10-2 وما إلى ذلك وهلم جرا.قد تحتاج إلى تجربة عدة تخفيفات لتحديد عامل التخفيف المناسب لغرفة العد. غرفة العد هي في الأساس صندوق صغير جدًا وواضح ومستطيل بعمق دقيق وشبكة دقيقة منقوشة عبر الجزء العلوي. يُعرف أيضًا باسم مقياس الهيموسيتومتر ، أو أحيانًا مقياس الدم. الهدف هو تخفيف التعليق بدرجة كافية بحيث عندما يتم عرضه في غرفة العد ، لا تتداخل الخلايا ، ويتم توزيعها في جميع أنحاء الشبكة بطريقة موحدة. ماصة التعليق المخفف الذي يحتوي على الخلايا في البئر في غرفة العد ، حيث يستقر في غرفة الشبكة من خلال العمل الشعري. ضع غرفة العد على مرحلة المجهر واعرضها تحت طاقة منخفضة.
تحتوي الشبكة على مربعات مكونة من مربعات أصغر. حدد ما يقرب من أربعة أو خمسة مربعات ، أو أي عدد تريده لحساب 100 خلية على الأقل ، بنمط من اختيارك ، مثل الزوايا الأربع والمربع المركزي. إذا كانت الخلايا كبيرة ، فقد تكون هذه هي المربعات الكبيرة ، ولكن إذا كانت الخلايا صغيرة ، يمكنك اختيار المربعات الأصغر بدلاً من ذلك.
قد يختلف الحجم المحدد لكل مربع شبكي حسب الشركة المصنعة لغرفة العد ، ولكن في كثير من الأحيان ، يكون عمق الغرفة 0.1 ملليمتر ، مساحة المربعات الكبيرة 1 ملليمتر مربع ، ومساحة المربعات الأصغر 0.04 متر مربع ملليمتر. حجم المربعات الأكبر ، إذن ، هو 0.1 ملليمتر مكعب. في هذا المثال ، افترض أنك قمت بحساب إجمالي 103 خلايا في خمسة مربعات ، وأنك قمت بتخفيف العينة الأولية حتى أصبح عامل التخفيف 10-2.
إذا كان حجم كل مربع شبكي 0.1 ملليمتر مكعب وتم حساب خمسة ، فإن الحجم الإجمالي للغرفة التي تم حسابها كان 0.5 ملليمتر مكعب ، وكان هناك 103 خلايا. مضاعفة لجعله 1 مليمتر مكعب سيجعله 206 خلية. السنتيمتر المكعب الواحد يعادل 1 مليلتر ، وهو قياس مفيد للسوائل. هناك 1000 مليمتر مكعب في السنتيمتر المكعب. لذلك ، إذا كان هناك سنتيمتر مكعب ، أو مليلتر ، معلق ، فستحسب 206000 خلية (206 × 1000). هذا ما تبدو عليه كمعادلة:
حجم مربع الشبكة × عدد المربعات المحسوبة = الحجم الكلي للتعليق المحسوب
عدد الخلايا ÷ حجم التعليق المحسوب = عدد الخلايا لكل ملليمتر مكعب
عدد الخلايا في المليمتر مكعب × 1000 = عدد الخلايا لكل مليلتر
ستحتاج إلى حساب أي تخفيف يتم إجراؤه لجعل المحلول الأولي قابلاً للعد تحت المجهر. في هذا المثال ، عامل التخفيف هو 10-2. لحساب التركيز الأولي للمحلول:
عدد الخلايا في المليلتر ÷ عامل التخفيف = تركيز الخلية
في هذا المثال ، عدد الخلايا لكل مليلتر هو 206000 ، وقسمة ذلك على 10-2 يعطي (0.01) تركيزًا خلويًا قدره 20600000 خلية لكل مليلتر في العينة الأولية.