استخراج الحمض النووي بطريقة التخزين المؤقت

حمض وبروتينات الديوكسي ريبونوكليك. يتم تنظيم الحمض النووي في وحدات تسمى الجينات ، كل منها يرمز إلى RNA معين أو تسلسل بروتيني. تتم دراسة الجينات للتعرف على التركيب والوظيفة البيولوجية والتطور والمرض والعديد من الجوانب الأخرى للنظم الحية. لدراسة الجينات بالتفصيل ، يجب عزل الحمض النووي وتنقيته من الخلايا ذات الأهمية.

على الرغم من إمكانية استخراج الحمض النووي من خلية واحدة ودراستها ، إلا أنه لا يكفي رؤيته بالعين المجردة. للحصول على كمية كافية للتخزين المؤقت ، فكلما زاد عدد الخلايا التي يتعين عليك العمل معها كان ذلك أفضل (عدة ملايين).

تختلف البروتوكولات الدقيقة اختلافًا كبيرًا لمراعاة الخصائص الفريدة لعينات محددة ، ولكن الخطوات العامة هي التجانس والتحليل والهضم والفصل والجمع. من الأفضل تنفيذ الإجراء في أنبوب زجاجي أو بلاستيكي صغير (حسب حجم العينة).

عادةً ما يتم مزج العينة أو طحنها لفصل الخلايا تمامًا عن بعضها البعض. هذا يجعل مكونات الخلية أكثر سهولة في الكواشف التالية. ثم يضاف المنظف أو الإنزيمات إلى المجانسة لتحليل أغشية الخلايا (والأغشية النووية إذا كانت الخلايا حقيقية النواة) لتحرير الحمض النووي. في هذه المرحلة ، يكون الحمض النووي محاطًا بالبروتينات والدهون والكربوهيدرات وكل شيء آخر كان موجودًا في الخلايا.

قد يكون من الضروري إجراء مزيد من الهضم الأنزيمي لتحطيم البروتينات حتى لا ترتبط بالحمض النووي وتتداخل مع جمعها. يُفصل الحمض النووي عن باقي محتويات الخلية بإضافة كحول بارد أو نقي أو إيثيل أو أيزوبروبيل. الحمض النووي غير قابل للذوبان في هذه الكحوليات ، لذلك سوف يتكثف لمحاولة تقليل ملامسته للكحول. ثم يتم جمع الحمض النووي المكثف ، عادة عن طريق الطرد المركزي أو التخزين المؤقت.

يكون جمع الحمض النووي عن طريق التخزين المؤقت فعالاً عندما يتم الحصول على كمية كبيرة من الحمض النووي من إجراء الاستخراج. إنها أيضًا طريقة عرض ممتازة نظرًا لأن التشابك الرائع للحمض النووي النقي واضح للعيان.

يجب تنفيذ خطوة الفصل بعناية من أجل تخزين الحمض النووي. إذا لم يكن جزءًا من خليط كاشف التحلل المضاف مسبقًا ، فيجب إضافة محلول ملح مركز (كلوريد الصوديوم) إلى المحلول قبل خطوة إضافة الكحول. يُسكب الكحول البارد ببطء على جانب أنبوب الاختبار لتشكيل طبقة فوق المحلول المائي ، لتجنب الخلط. إذا تم القيام به بشكل صحيح ، سيشكل الكحول طبقته الخاصة فوق الطبقة المالحة. ثم يأتي التخزين المؤقت.

لجمع الحمض النووي من الطبقة المالحة ، ضع قضيبًا زجاجيًا بحذر من خلال طبقة الكحول حتى يلامس قاع الأنبوب. قم بتدوير القضيب ببطء بين الأصابع ، أثناء مشاهدة الواجهة بين الطبقتين. إذا كان هناك ما يكفي من الحمض النووي ، فسوف يتجمع معًا عند السطح البيني بين الطبقات لتشكيل كتلة حليبية شفافة. قم بتدوير القضيب للف الحمض النووي من حوله (أي جزء التخزين المؤقت) واسحبه خارج الأنبوب. يمكن نقل الحمض النووي إلى أنبوب آخر من الكحول النقي للتخزين أو مزيد من التحليل.