مزايا وعيوب لطخة ويسترن

لطخة ويسترن ، وهي تقنية تحليلية تستخدم لتحديد بروتين معين في عينة معينة ، توظف قدرة إنزيم أو جسم مضاد أولي مرمز بالفلور على الارتباط بمولد الضد الخاص به. إنها عملية من ثلاث خطوات تبدأ بالهلام الكهربائي للهلام ، يليها نشاف الغشاء والسبر بالأجسام المضادة. قد يكون اكتشاف البروتين مباشرًا أو غير مباشر ، حيث يستخدم الأخير جسمًا مضادًا ثانويًا مرمزًا موجهًا ضد الأساسي. على الرغم من قبولها كأسلوب روتيني لتحليل البروتين ، إلا أن لطخة غربية قيودًا بالإضافة إلى فوائدها.

واحدة من أكبر الحجج لصالح لطخة غربية هي حساسيتها. نظرًا لقدرتها على اكتشاف ما لا يقل عن 0.1 نانوجرام من البروتين في العينة ، يمكن لهذه التقنية نظريًا أن تكون بمثابة أداة فعالة للتشخيص المبكر ، تستشعر حتى أدنى استجابة مناعية من فيروس أو بكتيريا لدى المريض عينة. تعتمد لطخة غربية غير مباشرة على هذه الحساسية من قدرة الجسم المضاد الثانوي على تضخيم شدة الإشارة المكتشفة بواسطة نظام التصوير. تعني الحساسية الأكبر أن هناك حاجة إلى عدد أقل من الأجسام المضادة للاختبار ، مما يقلل من تكاليف المختبر بشكل كبير.

تدين تقنية اللطخة الغربية بخصوصياتها إلى عاملين مساهمين كبيرين. أولاً ، يقوم الرحلان الكهربائي للهلام بفرز العينة إلى بروتينات ذات أحجام وشحنة وتشكل مختلفة. هذه العملية في حد ذاتها هي خطوة كبيرة نحو الاكتشاف ، حيث أن العصابات المتكونة في الهلام تعطي بالفعل أدلة حول حجم البروتين أو عديد الببتيد محل الاهتمام. تعتبر خصوصية التفاعل بين الجسم المضاد والمستضد العامل الثاني الكبير. نظرًا لأن الأجسام المضادة المحددة تظهر تقاربًا لبروتينات معينة ، يمكن للعملية أن تكتشف بشكل انتقائي البروتين المستهدف حتى في خليط من 300000 بروتين مختلف.

على الرغم من حساسيتها وخصوصياتها ، لا يزال بإمكان لطخة غربية أن تنتج نتائج خاطئة. تظهر النتائج الإيجابية الكاذبة عندما يتفاعل الجسم المضاد مع بروتين غير مقصود ، وهو ما يحدث كثيرًا يحدث عندما يصاب المريض الذي يتم اختباره لفيروس نقص المناعة البشرية بالسل أو عدد من الطفيليات الالتهابات. من ناحية أخرى ، يمكن أن تنتج النتائج السلبية الكاذبة بسهولة إذا لم يتم إعطاء البروتينات الكبيرة الوقت الكافي للانتقال بشكل صحيح إلى الغشاء. غالبًا ما ينتج عن النشاف والمعالجة غير الصحيحين نطاقات منحرفة أو باهتة أو حتى متعددة ، مما يجعل نتائج الاختبار عرضة لتفسير الفني.

تكلفة اللطخة الغربية هي مركب من النفقات الفردية الكبيرة للأجسام المضادة الموسومة والمحللين المهرة ومعدات المختبرات. تتطلب عملية النشاف الغربي الدقيقة الدقة في كل خطوة لتحديد مكونات العينة بشكل صحيح. يمكن أن يكون الخطأ البسيط في تركيز الكاشف أو في فترة الحضانة كارثيًا للعملية بأكملها. أخيرًا ، يمكن أن تكون المعدات المطلوبة للكشف والتصوير - أنظمة الكشف الكيميائي أو الفلوريسنت أو المشعة أو الليزر - باهظة الثمن بالنسبة لوحدة الأحياء الدقيقة المتوسطة.