يستخدم مرق المغذيات السائلة لزراعة البكتيريا مثل الإشريكية القولونية. تختلف وصفات هذا المرق باختلاف الأنواع البكتيرية ووجود تعديلات وراثية ، مثل مقاومة المضادات الحيوية. يمكن ترسيخ المرق عن طريق إضافة أجار ، والذي يمكّن البكتيريا من تكوين مستعمرات متميزة ، بينما في الثقافة السائلة تتفرق ببساطة في جميع أنحاء الحجم. هذه تقنية أساسية ولكنها ضرورية للطرق المتقدمة مثل استنساخ الجينات أو المقايسات الميكروبيولوجية. تفترض هذه المقالة أن سلالات الإشريكية القولونية المختبرية القياسية سيتم تربيتها على أطباق أجار مرق لوريا (LB) (أو أطباق بتري).
قم بوزن 10 جرامات من التربتون البكتيري ، 5 جرام من مستخلص الخميرة ، 5 جرام من كلوريد الصوديوم ، 15 جرامًا من الأجار أو الاغاروز ، و 1 مليلتر من هيدروكسيد الصوديوم 1N. امزجها مع كمية من الماء المعقم المقطر والمعقم حتى يتم الحصول على لتر واحد من الوسط. الأوتوكلاف الوسائط في زجاجات أو قوارير غير محكمة الإغلاق لمدة 25 دقيقة. اتركها لتبرد إلى ما يقرب من 50 درجة مئوية قبل إضافة الكواشف التي سيتم تدميرها عند درجة حرارة عالية ، مثل المضادات الحيوية أو المكملات الغذائية الأخرى.
اسمح لوسائل التعقيم بالتبريد إلى 50 درجة مئوية ولا تقل عن 45 درجة مئوية ، حيث سيتم وضع الأجار في الحاوية الخاصة به قبل أن يتم سكبه. احصل على أطباق بتري معقمة وصب ما يكفي لتغطية مساحة سطح اللوحة بأكملها ونصف عمقها على الأقل تجنب الإفراط في ملء الأطباق ويفضل عدم السماح للأجار بالاتصال بالحافة العلوية للطبق. اسمح للألواح بالتصلب في بيئة معقمة (على سبيل المثال ، تحت غطاء التدفق الصفحي) عن طريق ترك الأغطية مغلقة وإلى ركن من غطاء المحرك.
جفف الأطباق. على الرغم من أنه يمكن استخدام الألواح بمجرد ضبطها ، إلا أن بعض الرطوبة ستكون موجودة على سطح الأجار ، مما سيمنع المستعمرات البكتيرية من الالتصاق بشكل كافٍ. لذلك ، من الأفضل تجفيف الأطباق قبل وضع أي بكتيريا ، على سبيل المثال عن طريق تركها للجلوس عليها درجة حرارة الغرفة لبضعة أيام أو لمدة نصف ساعة تحت غطاء التدفق الصفحي أو في درجة حرارة 37 مئوية حاضنة.
قم بتخزين الأطباق. يجب رص الأطباق المجففة مقلوبة (مقلوبة) على أغطيةها وإعادتها إلى حالتها الأصلية تغليف ، مغلق بشريط لاصق وملف إما بورق احباط للحماية من الضوء أو بشكل مناسب وعاء. اكتب دائمًا تاريخ التحضير على الأطباق وتجنب الاستخدام إذا كان عمر اللوحات أكثر من شهرين.
مراجع
- "البروتوكولات الحالية في علم الأحياء الجزيئي"؛ كارين إلبينج وروجر برنت ؛ 2002
نصائح
- قم بتنفيذ أكبر عدد ممكن من الخطوات المذكورة أعلاه (يفضل جميعها) قدر الإمكان في بيئة معقمة (على سبيل المثال ، تحت اللهب المكشوف ، أو غطاء التدفق الرقائقي) لمنع الملوثات البكتيرية المحمولة جواً من الدخول والنمو في وسائط.
عن المؤلف
بالمر أويونغ حاصل على درجة الماجستير في إدارة الأعمال الدولية من جامعة كاليفورنيا في سان دييغو وأ ليسانس الآداب في علم الاجتماع من جامعة كاليفورنيا في سانتا باربرا وهو مدرب جزيئي أحيائي. كان كاتبًا مستقلاً منذ عام 2006. بالإضافة إلى الكتابة ، فهو تاجر فوركس متفرغ ومسوق عبر الإنترنت.
اعتمادات الصورة
جوبيتيريماجيس / كومستوك / جيتي إيماجيس
