استنساخ TA هو طريقة بسيطة ومريحة لاستنساخ فرعي منتجات تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR). "TA" هي اختصار لكلمة "ثايمين" و "أدينين". تستخدم تقنية الاستنساخ هذه قدرة الثايمين على التهجين إلى الأدينين في وجود ligases. لا يتم استخدام إنزيمات التقييد ، على عكس طريقة الاستنساخ الفرعي التقليدية. بدلاً من ذلك ، يتم تضخيم منتجات PCR باستخدام إنزيمات Taq polymerases.
طريقة
تستخدم طريقة استنساخ TA نشاط ترانسفيراز الطرفي لحمض ديوكسي ريبونوكلييك متدلي على كل طرف من منتج PCR.
يتم استخدام متجه الاستنساخ الخطي مع أحاديات مفردة وثلاثية T (3'-T) تسمى ناقل T لاستنساخ منتج PCR هذا إلى ناقل بلازميد. يتم خلط منتج PCR مع هذا المتجه بنسب عالية.
يضاف DNA ligase (T4 ligase) إلى الخليط ، مما يمكّن المنتجين من التهجين والانضمام.
المميزات والعيوب
يعد استنساخ TA طريقة ملائمة لاستنساخ نواتج PCR في المتجه الخطي ، وهو أبسط وأسرع بكثير من طرق الاستنساخ الفرعية التقليدية. نظرًا لأن هذه الطريقة لا تستخدم الإنزيمات المقيدة ، يمكن استنساخ المنتجات التي لا تحتوي على مواقع إنزيمات مقيدة.
ومن العيوب أن مجموعات استنساخ TA باهظة الثمن ، وبالتالي فإن استخدامها محدود. إلى جانب ذلك ، لا يوجد استنساخ اتجاهي ؛ لذا فإن احتمال الاستنساخ في اتجاه معاكس أكبر.
مجموعات TA الاستنساخ
يبيع العديد من المصنّعين مجموعات استنساخ TA. بعضها Invitrogen و QIAGEN و Premier Biosoft.