يسلمك مدرسك عينة من البكتيريا ويسألك: كم عدد الكائنات الحية الدقيقة القابلة للحياة في هذه العينة؟ ماذا يعني هذا ، وكيف تعرفه؟ أحد الأساليب هو إيجاد عدد مستعمرة(كفو).
ما هي CFU؟
يشير CFU إلى عدد المستعمرات الفردية لأي كائن حي دقيق ينمو على لوح من الوسائط. تمثل هذه القيمة بدورها عدد البكتيريا القادرة على التكاثر لأنها شكلت مستعمرات على الصفيحة. هناك صيغة CFU تتضمن أخذ العينات.
كيف تجد CFU؟
يعد حساب عدد البكتيريا في العينة السائلة أمرًا صعبًا للغاية. هناك الكثير منهم ، وهم صغيرون جدًا. علاوة على ذلك ، قد يكون بعضهم ميتًا والبعض الآخر على قيد الحياة ، ولا يحسب الموتى من المجموع. أنت مهتم فقط في قابل للحياة البكتيريا أو البكتيريا التي يمكن أن تتكاثر. إذن كيف يمكنك معرفة عدد البكتيريا الموجودة لديك؟
بنفس الطريقة التي يمكنك من خلالها إجراء استطلاع على 1000 شخص وتطبيقه على 10000 شخص لمعرفة كيف يمكن أن يفكروا في موضوع معين. يمكنك محاولة أخذ جزء صغير من العينة الأصلية ، ومعرفة عدد البكتيريا الموجودة فيها هذا الجزء ، ثم احسب لتقريب العدد الذي ربما كان موجودًا في الأصل عينة.
استخدام التخفيفات لإيجاد CFU
يتضمن إجراء العثور على CFU لعينة معينة تمييع هذه العينة أولاً. ثم يتم طلاء التخفيفات على ألواح ذات وسيط النمو الصحيح. غالبًا ما تكون التخفيفات المتعددة فكرة جيدة لأن العينة الأصلية يمكن أن تكون مركزة جدًا.
بعد السماح للبكتيريا بالنمو على الأطباق لفترة معينة من الوقت ، مستعمرات فردية تحسب على طبق. إذا كانت العينة مركزة للغاية ، فبدلاً من المستعمرات الفردية ، سترى مساحة كبيرة مغطاة بالنمو البكتيري والتي تسمى العشب. هذا يعني أنه يجب عليك تخفيف عينتك بشكل أكبر ومحاولة النمو مرة أخرى حتى تتمكن من رؤية المستعمرات الفردية.
نظرًا لأن المستعمرات الفردية تأتي من بكتيريا واحدة تضاعف نفسها عدة مرات ، فإن هذه المستعمرات فقط تحتسب في CFU.
الإجراء التجريبي لإيجاد CFU
مثال على استخدام التخفيفات لإجراء حساب CFU يمكن أن يكون على النحو التالي: أولاً ، من العينة الأولية التي قدمها لك معلمك ، تأخذ 1 مل وتضعها في لوحة. في اليوم التالي ترى أن هناك عشبًا للبكتيريا. هذا يعني أنه لا يمكنك حساب عدد CFU. الخطوة التالية هي عمل بعض التخفيفات.
أولاً ، تأخذ 1 مل من العينة وتخففها إلى 9 مل من الوسائط السائلة. نظرًا لأن التخفيف عبارة عن عينة مكونة من جزء واحد إلى تسعة أجزاء مخفف ، يشار إليه على أنه تخفيف بنسبة 1:10. بعد ذلك ، تأخذ 1 مل من التخفيف 1:10 وتضيف ذلك إلى 9 مل من الوسائط السائلة. هذا التخفيف هو تخفيف بنسبة 1: 100. أخيرًا ، يمكنك إجراء تخفيف 1: 1000 عن طريق أخذ 1 مل من التخفيف 1: 100 وإضافة 9 مل من الوسائط السائلة. لكل تخفيف ، لديك الآن 10 مل من المزرعة البكتيرية المخففة.
تم إجراء التخفيفات ، قم بوضع 0.5 مل من التخفيفات على الأطباق. تأكد من تسمية اللوحات التي تم طلاء التخفيف بها.
في اليوم التالي عدت لترى أن جميع الأطباق بها مستعمرات فردية. تريد اختيار لوحة بين 30 و 300 مستعمرة. ترى أن لوحة التخفيف 1: 1000 تحتوي على حوالي 10 مستعمرات ، وهذا يعني أنك أفرطت في تخفيف العينة. هذه اللوحة لن تكون مفيدة في إيجاد CFU.
تحتوي لوحة التخفيف 1:10 على العديد من المستعمرات ، ربما أكثر من 300. في هذه الحالة يمكنك الذهاب إلى لوحة 1: 100. تقوم بعد المستعمرات على هذه اللوحة وتجد أن لديها 179 مستعمرة. هذا يعني أن 0.5 مل من التخفيف 1: 100 يحتوي على 179 CFU. لكن ماذا عن العينة الأصلية؟
ما هو حساب CFU؟
الآن بعد أن أصبح لديك بعض البيانات ، يمكنك إجراء حساب CFU في العينة الأصلية.
1. خذ الكمية التي قمت بطلائها (0.5 مل) واضربها في عامل التخفيف (0.01) للحصول على 0.005. يجب عليك القيام بذلك للعثور على عامل التخفيف الذي أدى إلى عدد CFU الخاص بك. هنا ، سمح لك نصف مليلتر من التخفيف 1: 100 بحساب CFU.
2. اقسم CFU من التخفيف (179) بالنتيجة من الخطوة 1 (0.005) للحصول على 35800 CFU.
هذا يعني أن 1 مل الأصلي من العينة التي تم تخفيفها يحتوي على 35800 وحدة تشكيل مستعمرة. طريقة أخرى لوضع هذا هو القول أن العينة الأصلية بها 35800 CFU / مل.
تعد CFU أداة رائعة لمعرفة عدد البكتيريا أو الفطريات أو أي كائنات دقيقة موجودة في عينة معينة. طريقة الطلاء الموصوفة هنا مفيدة بشكل خاص للعينات شديدة التركيز أو الكائنات التي لا تنمو بشكل جيد في الثقافة السائلة.