كيفية عد المستعمرات في علم الأحياء الدقيقة

تتمثل إحدى الطرق التقليدية لتحديد تركيز الميكروبات في العينة في تخفيف العينة ، وتنمية الميكروبات على الأطباق ، وعد المستعمرات. تنمو الميكروبات المطلية من وحدة تشكيل مستعمرة تتكون من خلية واحدة أو أكثر إلى مستعمرة مرئية يمكن رؤيتها وإحصائها. البكتيريا هي الميكروب الأكثر شيوعًا للتقييم باستخدام عدد الصفائح. يستخدم تعداد المستعمرات لاكتشاف وعد الميكروبات في التربة والماء والغذاء. تؤكد بروتوكولات عد المستعمرات على نهج دقيق ومنهجي.

إذا قمت ببساطة بتلطيخ عينة ميكروب على لوحة أجار ، فسترى العديد من الوحدات المكونة للمستعمرات بحيث تمتزج المستعمرات الفردية معًا ، مما يجعل من المستحيل عدها. لحل هذه المشكلة ، قم بخلط العينة في وسط سائل ، وأخذ كمية صغيرة من هذا الخليط وقم بتخفيفها. كرر هذه العملية من ست إلى 10 مرات. انشر التخفيف النهائي على طبق أجار واحتضنه لمدة أربعة إلى سبعة أيام قبل أن تحصي المستعمرات.

الحيلة الأساسية في عد المستعمرات هي حساب نقطة كل مستعمرة مرة واحدة. تتمثل إحدى الطرق في تعيين طبق بتري على خلفية شبكية وعد المستعمرات في كل خلية شبكية ، والتحرك بنمط منهجي عبر جميع الخلايا. يمكن أيضًا أن يكون وضع علامة على المستعمرات المحسوبة على ظهر طبق بتري طريقة مفيدة. بشكل عام ، سوف تحتاج إلى حساب ثلاث لوحات على الأقل ؛ استخدم فقط اللوحات التي تحتوي على 30 إلى 300 مستعمرة للتوصل إلى استنتاجات قوية ، كما تقترح شبكة علم الأحياء الدقيقة ، وهي شركة تقدم خدمات استشارية للمختبرات والمصنعين. يجب إعادة طلاء الألواح ذات المستعمرات الكثيرة جدًا التي لا يمكن عدها أو التي تحتوي على عدد قليل جدًا من المستعمرات من التخفيف الجديد.

يضيف الخطأ البشري إلى الوقت الذي يستغرقه عد الطوائف يدويًا. لتحسين الدقة والكفاءة ، ضع طبق بتري في جهاز عد مستعمرة آلي. تأخذ عدادات المستعمرات الآلية صورة للطبق ، وتفصل المستعمرات عن الخلفية ثم تستخدم خوارزمية لعد المستعمرات على اللوحة. يمكن أن تواجه الخوارزميات صعوبات في التمييز بين المستعمرات عندما تتلامس مستعمرتان أو أكثر عند الحواف ، لذا فإن هذا مجال من مجالات التطوير المستمر للبرامج.

دقة حساب كثافة الميكروبات من تعداد المستعمرات لها بعض القيود. يمكن أن تكون وحدات تكوين المستعمرات خلية واحدة أو سلسلة من الخلايا أو مجموعة كاملة من الخلايا. الافتراض هو أن المستعمرة تمثل خلية واحدة ، لذلك يمكن أن تكون التركيزات المحسوبة من عدد المستعمرات منخفضة. تحتاج الميكروبات المختلفة إلى ظروف نمو مختلفة ، والمستعمرات الموجودة على الصفيحة تمثل فقط تلك الميكروبات التي تزدهر على وسط النمو هذا في ظل ظروف الحضانة هذه. بالإضافة إلى ذلك ، لا يسجل تعداد المستعمرات الخلايا الميتة ، وهو اعتبار مهم عندما تحتاج إلى تركيز الخلايا في العينة الأصلية.