تُزرع البكتيريا في أطباق بتري على وسط صلب يُعرف بالأجار البكتيري ، حيث تتشكل مستعمرات دائرية مرتفعة. على عكس الخلية البكتيرية الفردية ، المستعمرة عبارة عن مجموعة من البكتيريا كبيرة بما يكفي لتكون مرئية للعين المجردة. يمكن قياس النمو البكتيري بملاحظة بسيطة لعدد المستعمرات الموجودة ؛ ومع ذلك ، تتضمن الأساليب الكمية استخدام غرفة العد ، أو في كثير من الأحيان ، عدد لوحات قابلة للتطبيق. يتم استخدام هذا الأخير بشكل متكرر لأنه يوفر أيضًا معلومات نوعية مثل تأثير ظروف النمو المختلفة. نظرًا لأنه قد يكون هناك مليارات البكتيريا في طبق بتري ، فإن القياس أولاً يتطلب تخفيف العينة حتى يمكن حساب عدد المستعمرات.
في أنبوب اختبار ، أضف 10 ميكرولتر من بداية البكتريا إلى 90 ميكرولتر من وسط التخفيف. أغلق غطاء الأنبوب بإحكام ودوامة برفق للحصول على مزيج متجانس. الآن العينة هي عُشر تركيزها الأصلي.
انقل 10 ميكرولتر من هذه العينة الجديدة إلى أنبوب اختبار جديد يحتوي على 90 ميكرولتر من وسط التخفيف ، واخلطه مرة أخرى. مرة أخرى ، ستكون النتيجة هي تخفيف العينة أكثر - الآن ستصبح واحدًا من مائة من تركيزها الأصلي. كرر هذا عدة مرات ، حتى يتم تخفيف العينة الأصلية بين 10
4 و 1010 مرات. تأكد من تسمية كل أنبوب بالتخفيف الصحيح ، على سبيل المثال 10-1, 10-2 وما إلى ذلك وهلم جرا.استغني عن 10 ميكرولتر من آخر التخفيف المكتمل على لوحة أجار. باستخدام حافة الانتشار ، قم بتوزيع المحلول البكتيري عبر كامل سطح لوحة أجار. كرر هذا لوحين إضافيين. من الشائع أيضًا تنفيذ هذه الخطوات بمستويات تخفيف أخرى للمقارنة. تأكد من تسمية قاع الأطباق. استبدل الأغطية الموجودة على كل لوحة واترك ألواح الأجار تجف لعدة دقائق إما على مقعد مختبر تحت اللهب أو في حاضنة. ضع الأطباق في الحاضنة التي يجب ضبطها على درجة الحرارة المناسبة لسلالة البكتيريا. اتركيه لينمو لمدة 12 إلى 16 ساعة.
يجب أن تكون المستعمرات مرئية بعد 16 ساعة ؛ ومع ذلك ، قد تتطلب بعض التعديلات الجينية وقتًا أطول (على سبيل المثال ، تطوير اللون). عندما تكون المستعمرات قابلة للملاحظة ، أخرج الألواح وابحث عن المستعمرات التي تحتوي على ما بين 30 و 300 مستعمرة. باستخدام علامة دائمة ، ضع نقطة على الجزء السفلي من طبق بتري - جانب الأجار وليس الغطاء - أينما تكون المستعمرة مرئية من خلال الأجار. عد كل نقطة علامة. كرر لكل طبق.
لقياس كمية البكتيريا في مزرعة البداية لهذه التجربة ، يجب عكس التخفيف في الحسابات ، في مكانين. أولاً ، عندما أخذت ميكروليترًا واحدًا من أنبوب الاختبار لوضعه في طبق بتري ، فقد أخذت عُشر العينة المخففة ، لذلك تحتاج إلى ضرب كل شيء في 10 لعكس ذلك. بالإضافة إلى ذلك ، إذا كان عامل التخفيف في أنبوب الاختبار ، على سبيل المثال ، 10-7، ثم يجب ضرب عدد المستعمرات بـ 107 من أجل عكس تأثير التخفيف. ما عليك سوى إزالة الإشارة السالبة من الأس في العمليات الحسابية. استخدم الصيغة:
[عدد الخلايا المحسوبة] × 10 × [كم مرة يجب مضاعفة العينة للوصول إلى التركيز الأصلي: على سبيل المثال ، 105] = عدد وحدات تشكيل المستعمرة (CFU) لكل مليلتر من بداية الثقافة. هذا هو النمو البكتيري في أطباق بتري الخاصة بك.