مكونات مخازن التحلل

ليس كلمة مشتقة من اليونانية وتعني فقط "أن تنقسم" أو "تنفجر". يتعلق بما يحدث للخلايا في محلول تحلل ، وهو محلول يفتحها لاستخراجها محتويات. يستخدم العلماء محلول التحلل عند استخراج الحمض النووي أو البروتينات من الخلايا لتحليلها ، خاصة في حالة البكتيريا. يختلف نوع المخزن المؤقت لتحلل الخلايا باختلاف نوع التجربة ، على الرغم من أن الخيارات التالية هي بعض الخيارات الشائعة.

TL ؛ DR (طويل جدًا ؛ لم أقرأ)

تساعد مخازن التحلل على كسر الخلايا المفتوحة ، بحيث يمكن الوصول إلى محتوياتها أو إزالتها. تتضمن بعض الأمثلة الأملاح والمنظفات والعوامل المخلبية والمثبطات وبعض المواد الكيميائية القلوية.

تعمل المخازن المؤقتة على استقرار درجة الحموضة أثناء انقسام الخلايا. يقف Tris-HCL كواحد من أكثر المواد الكيميائية شيوعًا للتخزين المؤقت عند درجة الحموضة 8. HEPES هو مادة كيميائية عازلة شائعة أخرى في هذه التجارب. قد يرفع ملح كلوريد الصوديوم أيضًا القوة الأيونية ، أي التركيز الكلي للمواد المذابة خارج الخلايا. هذه النقطة الأخيرة لها بعض الأهمية لأن الماء يمكن أن ينتشر عبر أغشية الخلايا من مناطق تركيز منخفض الذائبة إلى مناطق ذات تركيز عالي الذائبة.

تعمل المنظفات على إذابة أغشية الخلايا حتى تتمكن محتويات الخلية من الهروب. التركيب الجزيئي له و amphipathic (أي الجزيئات ذات النهاية الواحدة التي تتفاعل بسهولة مع جزيئات الماء بينما لا تتفاعل النهاية الأخرى الكارهة للماء أو "المخيفة للماء"). يمكنهم إذابة الدهون عن طريق تكوين مذيلات ، مجموعات صغيرة حيث تتجه الذيل الكارهة للماء لجزيئات المنظف إلى الداخل نحو جزيئات الدهون. تشمل المنظفات الشائعة كبريتات دوديسيل الصوديوم أو SDS و NP-40 و tritonX.

تشتمل مخازن التحلل عادةً أيضًا على عوامل مخلبية مثل حمض إيثيلين ديامينيترا أسيتيك (EDTA) أو حمض إيثيلين جلايكول رباعي الخليك (EGTA). ترتبط هذه المواد الكيميائية بأيونات المعادن بشحنتين موجبتين (على سبيل المثال ، المغنيسيوم والكالسيوم) ، مما يجعلها غير متاحة للتفاعلات الأخرى. يحتاج العديد من الحمض النووي (البروتينات التي تمضغ الحمض النووي) والبروتياز (البروتينات التي تقطع بروتينات أخرى) إلى أيونات المغنيسيوم من أجل وظيفة ، لذلك من خلال حرمانهم من هذا المكون الرئيسي ، يساعد EDTA و EGTA على تقليل مستوى البروتياز أو DNAse نشاط. ومع ذلك ، فإنهم لا يستبعدون ذلك تمامًا ، ولا تعتمد بعض البروتياز على العوامل المساعدة للمغنيسيوم ، لذا فإن محلول التحلل في بعض الأحيان تشمل أيضًا مواد كيميائية تسمى مثبطات الأنزيم البروتيني ، والتي ترتبط بالبروتياز وتمنعها من العمل بصورة صحيحة.

التحلل القلوي ، وهو أسلوب شائع جدًا لتنقية البلازميدات من البكتيريا ، يتضمن ثلاثة حلول. يحتوي الأول على الجلوكوز ، ومخزن تريس- HCL ، و EDTA ، و RNAses. ينتج الجلوكوز تركيزًا عاليًا من الذائبة خارج البكتيريا بحيث تصبح مترهلة قليلاً ، مما يجعلها أسهل في التحلل. وظيفة EDTA و tris-HCL كما تم وصفها بالفعل ، بينما يقوم RNAse بمضغ أي RNA داخل الخلية لإبعاده عن الطريق. الحل الثاني في الواقع يزيل الخلايا. يحتوي هذا المنتج على منظف SDS و NaOH ، مما يرفع درجة الحموضة إلى 12 أو أعلى ، مما يؤدي إلى تغيير طبيعة البروتينات داخل الخلية وتسبب في فصل الحمض النووي إلى خيوط مفردة. يحتوي المحلول الثالث على أسيتات البوتاسيوم لإعادة الأس الهيدروجيني إلى مستوى أكثر حيادية بحيث يمكن أن تعود خيوط DNA البلازميدية معًا. في غضون ذلك ، تتكتل البروتينات المشوهة وتتراكم ، بينما تأتي أيونات دوديسيل-كبريتات مع أيونات البوتاسيوم لتكوين مركب غير قابل للذوبان ، والذي يترسب أيضًا من المحلول.