Гель-електрофорез - метод, який використовується в лабораторіях для розділення ДНК (дезоксирибонуклеїнова кислота). Також його можна використовувати для розділення РНК та білків.
Зчитування результатів гель-електрофорезу дозволяє дослідникам визначити розмір ниток у зразку. Щоб зрозуміти, як працює процес, спочатку слід вивчити визначення гель-електрофорезу.
Визначення електрофорезу в гелі
Гель-електрофорез - потужний засіб, що застосовується в Росії молекулярна біологія для визначення розміру та електричного заряду ДНК, РНК та білків. Ви починаєте з використання шматочків ДНК, які перетравлюються ферментами з більшого ланцюга ДНК.
Використовуючи в якості результатів інтенсивність діапазону гелевого електрофорезу, ви можете з’ясувати, який розмір фрагментів. Тоді можна отримати a Відбиток пальця ДНК.
Як показує “електро” частина слова, a визначення гель-електрофорезу тягне за собою використання електричного поля. Використовується спеціальна машина, яка містить буферний розчин, який покриває електроди, лунку для суспензії гелю всередині і самі електроди.
Гель в гель-електрофорезі
Гель-електрофорез вимагає використання гелю, сформованого в плиту, зазвичай виготовлену з очищеного варіанту агару з морських водоростей, званого агарозою.
Агарозні гелі зробити пористу матрицю, через яку заряджені молекули різного розміру можуть рухатися з різною швидкістю. Хімічна речовина, що називається бромід етидію (EtBr), додається до розчину гелю перед заливанням його у форму.
Якщо у вас дуже малі молекули ДНК або білка, щоб розділити їх, можливо, вам доведеться використовувати a поліакриламідний гель замість агарози. Зважайте на використання поліакриламіду, оскільки він є нейротоксичним.
Спеціальний гребінець поміщається у форму для агарозного гелю, а потім обережно виймається після затвердіння. Тут розміщують фрагмент ДНК або інші молекулярні зразки, попередньо змішані зі спеціальним завантажувальним барвником. завантажувальний барвник полягає лише у відстеженні руху ДНК, оскільки інакше це не видно.
Є також криниця, що містить те, що називається а ДНК сходи або маркером. Це служить високоякісним шаблоном із відомими розмірами смуг для порівняння розмірів із досліджуваними зразками ДНК. Після застосування електричного поля ці негативно заряджені молекули рухатимуться через гель до позитивного кінця.
Результати електрофорезу в гелі
Як тільки молекули пройшли шлях до кінця гелю, настав час для зчитування результати гель-електрофорезу. Барвник EtBr у гелі легко зв'язується з ДНК, отже, і його використання, і тоді ви можете бачити смуги ДНК, які флуоресцирують під ультрафіолетовим світлом.
Ви повинні бути дуже обережними, щоб не торкатися броміду етидію, оскільки його спорідненість до ДНК також означає, що він може його розмотати; тому він вважається мутагеном. Зараз доступні новіші, безпечніші барвники, хоча їх цінові показники вищі.
УФ-світло виявляє інтенсивність гелевого електрофорезу в ДНК або інших молекулярних зразках. Розташування смужок на гелі показує розмір Фрагмент ДНК. інтенсивність смуги гель-електрофорезу виявляє концентрацію молекули.
Тепер ви можете порівняти смуги ДНК у своїх зразках із зразком ДНК-сходів. Відомі розміри смуг сходів допоможуть вам визначити відносний розмір ДНК, яку ви вивчаєте.
Важливість якісного гель-електрофорезу
Гель-електрофорез застосовували в Росії Відбитки пальців ДНК та криміналістика. Це допомогло дослідникам визначити інформацію про геноми багатьох видів. Використання високоякісного гелевого електрофорезу є важливим для цих важливих областей.
Тому надзвичайно важливо працювати з високоякісними інгредієнтами та ретельно дбати про виготовлення гелів. Важливо запобігти забрудненню зразків ДНК РНК або білками.
Обов’язково використовуйте чистий буфер, обережно вливайте гель, щоб його гребінці рівномірно формувались і підтримували всі реагенти при належній температурі. Гель-електрофорез інтенсивність смуги повинна бути яскравою і чистою, без слідів іншої ДНК на задньому плані, а також мазків РНК або білків, що забруднюють гель.