Вчені використовують проточну цитометрію для розмежування різних типів клітин або мікроскопічних організмів. Це інструмент, що використовується в багатьох додатках, таких як медична діагностика або судова патологія. Незважаючи на те, що цю експериментальну техніку досить легко здійснити, отриманий аналіз складних даних за допомогою проточного цитометра складніше через безліч експериментальних факторів та / або цитометра параметри. Таким чином, звичайно візуалізувати та аналізувати цитометричні дані за допомогою складних професійних програм, таких як CELLQuest або FlowJo. Знайомство з технологіями проточної цитометрії, механізмами та програмним забезпеченням необхідне для розуміння результатів, отриманих ними експерименти.
Уточніть мету експерименту, запитуючи: "Яке питання чи гіпотеза досліджувались?" Це буде необхідний для пристосування вихідних результатів до відповідного формату та параметрів для подальшого аналізу за допомогою статистичної цитометрії програмне забезпечення. Внесіть будь-які зміни, необхідні для відображення даних із відповідними налаштуваннями (наприклад, позитивні клітини, негативні ворота, інтенсивність флуоресценції, популяції клітин тощо).
Знайдіть ворота. Клітини можна згрупувати або просто спостерігати за кластеризацією на графіку щільності або контурній діаграмі. Групи часто розділяються залежно від їхньої особистості. Якщо одна група дуже інтенсивно забарвлюється для певного маркера або антитіла, робиться висновок, що всі члени цієї групи мають ідентичність конкретного типу клітин, що виражає цей маркер. Зазвичай зустрічаються клітини, позитивні для більш ніж одного з цих маркерів, і ці клітини, як правило, є проміжними і позначаються як "подвійні позитивні".
Подивіться на скатерграфи. Те, як групи клітин розподіляються в розрізненому графіку, є показником розміру клітин. Клітини з дуже великими або високими розсіями, як правило, є великими клітинами; однак вони можуть бути великими просто тому, що містять високу частку цитоплазми, а можуть бути високими, оскільки мають дуже велике ядро. Залежно від досліджуваної біології, це, звичайно, буде сильно відрізнятися залежно від експерименту.
Подивіться на цифри. Налаштуйте графіки для відображення різних параметрів на одній осі (як правило, осі X), зберігаючи відліки на осі Y. Це вказує на частку сукупності вибірки, яка є позитивною для цього конкретного параметра, як a пік зазвичай спостерігається у позитивно забарвленій пробі, яка відсутня у негативному контролі зразок.
Подивіться на багатопараметричні гістограми. Шляхом регулювання осі X та осі Y для кожної представляють різні параметри, які були досліджених під час експерименту, можна глибше зрозуміти властивості зразка. Наприклад, встановивши вісь X на червону флуоресценцію, а вісь Y на зелену флуоресценцію, ворота в стилі квадранта можна обчислити зразок, щоб показати чотири області квадранта, в яких клітини присутні і забарвлені на червону або зелену флуоресценцію, обидва кольори, або відсутні на всі. Це дозволяє розділити неоднорідну вибірку на складові частини та візуалізувати, а також кількісно визначати будь-які накладені сутності.
Список літератури
- “Аналіз даних проточної цитометрії”; Сьюзен Шарроу; 1991
- “Проточна цитометрія: прилади та аналіз даних”; Марвін Ван Діла; 1985
- “Протоколи проточної цитометрії”; Тереза та Роберт Хоулі; 2004
Про автора
Палмер Овунг має ступінь магістра мистецтв з міжнародного бізнесу в Каліфорнійському університеті в Сан-Дієго та Бакалавр мистецтв з соціології в Університеті Каліфорнії в Санта-Барбарі і є навченим молекулярним агентом біолог. Він є вільним письменником з 2006 року. Окрім того, що він пише, він є штатним трейдером Forex та Інтернет-маркетингом.
Фото кредити
Горошок РФ / Горошок / Getty Images
