Після того, як ви провели зразки ДНК на агарозному гелі і зробили знімок, ви можете зберегти знімок на потім, після чого ви зможете проаналізувати результати та інтерпретувати їх. Види речей, які ви шукаєте, залежатимуть від характеру експерименту. Наприклад, якщо ви робите дактилоскопію ДНК, ви хочете порівняти розмір шматочків ДНК із двох зразків - можливо, від підозрюваного та від місця злочину. Якщо ви працюєте з плазмідами від бактерій, навпаки, вам може знадобитися переконатися, що плазміда містить вставку. Отже, спосіб інтерпретації гелю частково залежатиме від проведеного експерименту. Тим не менше, є кілька загальних правил, які ви можете застосувати.
Зверніть увагу, що вам може знадобитися, а може і не знадобитися користуватися інструкціями з цього розділу. Електрофорез на агарозному гелі часто використовують для підтвердження того, що плазміда містить певну вставку. Якщо ви не працюєте з плазмідами, ви можете пропустити цей розділ. Однак, якщо ви є, ви можете слідувати цим інструкціям.
Зверніть увагу, що якщо ви працюєте з необрізаними або зрізаними плазмідами, ви не можете оцінити розмір, використовуючи процедуру з розділу 1 вище. Це тому, що необрізані та обрізані плазміди мігрують з різною швидкістю від лінійної ДНК.
Порівняйте кількість смуг у кожній смузі. Нагадаємо, що фермент рестрикції розрізає ДНК в місцях, де відбувається дана послідовність, яка називається сайтом рестрикції. Якщо зразок обробляли ДВА рестрикційними ферментами, повинна бути присутня смужка для вставки та смужка для решти плазміди. Це пов’язано з тим, що вставка буде оточена двома рестрикційними сайтами, кожен для різних ферментів, тому порізи на обох цих ділянках звільняють вставку від плазміди. Навпаки, розріз лише на одному місці перетворить плазміду в лінійну ДНК. Тоді зразок, зрізаний без ферментів рестрикції або одного ферменту рестрикції, повинен мати одну смужку, тоді як зразок, зрізаний двома ферментами рестрикції, повинен мати дві смуги.
Зверніть увагу на смуги, створені за допомогою ДНК-плазміди. У плазміди, що отримала зріз, є поріз лише в одній нитці, тому вона мігрує повільніше, ніж розрізана плазміда. Вирізані плазміди в свою чергу мігрують повільніше, ніж нерозрізана ДНК.
Оцініть розмір вкладиша, використовуючи процедуру, описану в розділі 1, та визначте, чи відповідає вона вашим очікуванням (яка буде відрізнятися залежно від експерименту).
Речі, які вам знадобляться
- Олівець
- Папір
- Програма електронних таблиць
- Зображення вашого гелю
- Лінійка