Рідкий поживний бульйон використовується для культивування таких бактерій, як кишкова паличка. Рецепти цього бульйону різняться залежно від виду бактерій та наявності генетичних модифікацій, наприклад, стійкості до антибіотиків. Відвар можна затвердіти, додавши агар, що дозволяє бактеріям утворювати чіткі колонії, тоді як у рідкій культурі вони просто розсіюються по всьому об'єму. Це основна, але необхідна техніка для передових методів, таких як клонування генів або мікробіологічні аналізи. У цій статті передбачається, що стандартні лабораторні штами кишкової палички слід культивувати на агарових пластинах бульйону Лурії (LB) (або чашках Петрі).
Зважте 10 грамів триптону, що містить бактерії, 5 грамів екстракту дріжджів, 5 грамів хлориду натрію, 15 грамів агару або агарози та 1 мілілітр 1 н. Гідроксиду натрію. Змішуйте їх з об'ємом дистильованої та автоклавованої стерильної води до отримання 1 літра середовища. Автоклавуйте носій у пляшках або колбах, що не закриваються, протягом 25 хвилин. Дайте охолонути приблизно до 50 градусів Цельсія, перш ніж додавати реагенти, які руйнуються при сильному нагріванні, такі як антибіотики або інші харчові добавки.
Дайте автоклавного середовища охолонути до 50 градусів Цельсія і не нижче 45 градусів Цельсія, оскільки агар застигне в контейнері перед тим, як його можна буде заливати. Отримайте стерильні чашки Петрі і налийте їх, щоб покрити всю поверхню пластини і принаймні половину її глибини. Уникайте переповнення тарілок і бажано не допускати контакту агару з верхнім краєм посуду. Дайте пластинам застигнути в стерильному середовищі (наприклад, під витяжкою з ламінарним потоком), не закриваючи кришок до кута витяжки.
Просушіть пластини. Незважаючи на те, що пластини можна використовувати, як тільки вони встановлені, на поверхні агару буде присутня деяка кількість вологи, що перешкоджатиме достатньому прилипанню колоній бактерій. Тому найкраще висушити пластини перед нанесенням будь-яких бактерій, наприклад, залишивши їх сидіти кімнатна температура протягом декількох днів або півгодини під витяжкою з ламінарним потоком або при 37 градусах Цельсія інкубатор.
Зберігайте тарілки. Висушені тарілки слід складати догори дном (перевернутими) на кришки і повертати до початкових упаковку, заклеєну скотчем і загорнуту у фольгу для захисту від світла, або у відповідну контейнер. Завжди пишіть дату приготування на тарілках і уникайте використання, якщо пластини віком більше 2 місяців.
Список літератури
- "Сучасні протоколи в молекулярній біології"; Карен Елбінг та Роджер Брент; 2002
Поради
- Виконуйте якомога більше вищезазначених етапів (бажано всі) в стерильних умовах (наприклад, під відкритим полум’ям або кришкою ламінарного потоку), щоб зупинити потрапляння та зростання повітряних бактеріальних забруднень у ЗМІ.
Про автора
Палмер Овунг має ступінь магістра міжнародного бізнесу в Каліфорнійському університеті в Сан-Дієго та Бакалавр мистецтв з соціології в Університеті Каліфорнії в Санта-Барбарі і є навченим молекулярним агентом біолог. Він є вільним письменником з 2006 року. Окрім того, що він пише, він є штатним трейдером Forex та Інтернет-маркетингом.
Фото кредити
Юпітерімадж / Комсток / Гетті Імідж