Бактерії вирощують у чашках Петрі на твердому середовищі, відомому як бактеріальний агар, де утворюються круглі колонії. На відміну від окремої бактеріальної клітини, колонія - це група бактерій, достатньо велика, щоб бути видимою неозброєним оком. Ріст бактерій можна виміряти простим спостереженням за кількістю колоній; однак, більш кількісні методи включають використання лічильної камери або, частіше, життєздатного підрахунку пластин. Останній використовується найчастіше, оскільки він також надає якісну інформацію, таку як вплив різних умов росту. Оскільки в чашці Петрі може бути мільярд бактерій, спочатку вимірювання вимагає розведення проби, щоб можна було підрахувати кількість колоній.
У пробірку додайте 10 мікролітрів вихідної бактеріальної культури до 90 мікролітрів середовища для розведення. Щільно закрийте кришку пробірки та обережно завихріть, щоб отримати однорідну суміш. Зараз зразок становить одну десяту від початкової концентрації.
Перенесіть 10 мікролітрів цього нового зразка в нову пробірку, що містить 90 мікролітрів середовища для розведення, знову перемішайте. Ще раз отримаємо зразок, який далі буде розбавлений - тепер він буде сотою від початкової концентрації. Повторіть це кілька разів, поки вихідний зразок не розведеться між 10
4 і 1010 разів. Переконайтеся, що на кожній пробірці є маркування правильного розведення, наприклад 10-1, 10-2 і так далі.Розподіліть 10 мікролітрів останнього розведення, завершеного на агарову пластину. За допомогою розподільного краю розподіліть розчин бактерій по всій поверхні агарової пластини. Повторіть це ще для двох тарілок. Також звичайно виконувати ці дії з іншими рівнями розведення для порівняння. Обов’язково маркуйте дно тарілок. Поставте кришки на кожну тарілку і дайте агаровим пластинам просохнути протягом декількох хвилин або на лабораторній лавці під полум’ям, або в інкубаторі. Помістіть пластини в інкубатор, для якого слід встановити температуру, відповідну штаму бактерій. Залиште рости на 12-16 годин.
Колонії повинні бути видні через 16 годин; однак для деяких генетичних модифікацій може знадобитися більше часу (наприклад, розвиток кольору). Коли можна спостерігати колонії, дістаньте тарілки і знайдіть ті, що містять від 30 до 300 колоній. За допомогою перманентного маркера поставте крапку на дно чашки Петрі - збоку з агаром, а не кришкою - скрізь, де через агар видно колонію. Підрахуйте кожну крапку маркера. Повторіть для кожної страви.
Щоб виміряти кількість бактерій у вихідній культурі для цього експерименту, розведення потрібно обернути у розрахунках у двох місцях. По-перше, коли ви взяли один мікролітр із пробірки, щоб покласти в чашку Петрі, ви взяли десяту частину розведеної проби, тому вам потрібно помножити все на 10, щоб це змінити. Крім того, якщо коефіцієнт розведення в пробірці становив, наприклад, 10-7, тоді кількість колоній потрібно помножити на 107 для того, щоб змінити ефект розведення. Просто видаліть від’ємний знак з показника ступеня в обчисленнях. Використовуйте формулу:
[Кількість підрахованих колоній] × 10 × [скільки разів потрібно помножити зразок, щоб отримати вихідну концентрацію: наприклад, 105] = Кількість колонієутворюючих одиниць (КУО) на мілілітр вихідної культури. Це бактеріальний ріст у ваших чашках Петрі.