Буферні розчини протистоять змінам рН, оскільки містять слабкі кислотно-основні кон'югати, які нейтралізують іони Н + та ОН-. Буферні розчини складаються з слабких кислот або основ і солі цієї кислоти або основи. Вибір відповідної буферної системи залежить від діапазону рН для буферизації. Більшість біологічних реакцій відбувається при діапазоні рН від 6 до 8. Фосфатні буфери буферизують в діапазоні рН від 6,5 до 7,5. Буфери карбонової кислоти корисні від pH від 3 до 6. Боратні буфери функціонують від рН 8,5 до 10. Амінокислотні буфери, такі як гліцин та гістидин, працюють у різних діапазонах рН. Трис-буфер є однією з найбільш часто використовуваних буферних систем у лабораторіях біології. Розрахунки для буферного розчину Tris будуть використані в наступному прикладі, але методологія застосовується до будь-якого буферного розчину.
Використовуйте добуток молярності та об'єму кінцевого розчину для визначення необхідних молей основи. Наприклад, якщо потрібно 2 літри 0,1 М розчину буфера Тріс, то кількість молей Трису потрібно:
Обчисліть масу необхідного буфера, помноживши кількість молей, необхідних на молекулярну масу основи. Наприклад, маса 0,2 молей основи Тріс дорівнює:
Розчиніть основу в дистильованій воді, використовуючи магнітну стрічку та мішалку. Розчиніть його в обсязі води лише трохи меншому, ніж кінцевий об'єм розчину (від 950 до 975 мл на кожен літр кінцевого розчину). Значення рН буфера Тріс змінюється залежно від концентрації і потребує корекції, якщо використовується занадто малий початковий об’єм. Також найкраще готувати буфер при тій самій температурі, яку він буде використовувати під час аналізу або експерименту, оскільки Тріс має великі температурні зміни рН.
Поради
- Щоб заощадити час при приготуванні буферного розчину, ви можете використовувати готові буферні концентрати при необхідному pH та розбавляти для бажаної молярності та об’єму. Приготуйте буферний розчин при тій же температурі, яку він буде використовувати, щоб уникнути значних змін рН. Уникайте трудомістких регулювань рН, титруйте лише після розведення до потрібної концентрації. Розчинення в занадто малому обсязі призведе до повторних титрувань.
Попередження
- Будьте обережні при роботі з кислотами та основними речовинами. Носіть захисні окуляри.
Про автора
Карла Буліанн - еволюційний біолог за освітою та письменниця-фрілансер за пристрастю. Окрім того, що вона пише для Demand Studios та eHow, вона є автором фільму «Виховання обдарованої дитини» на Suite101.com. Вона захоплюється вивченням нових тем завдяки великим дослідженням.
Фото кредити
Фото надано Еммі П. @ morgueFile.com