Високоефективна рідинна хроматографія - це техніка лабораторного аналізу суміші. Це ефективний тип хроматографії, який використовує високий тиск, а не просто гравітацію, для просування зразка суміші через колонку. Зразок впорскується, потім насос, що містить велику кількість тиску, допомагає перемістити зразок вздовж упакованої колони, де він розділений на окремі компоненти. Потім це поділ аналізується детектором для отримання результатів.
Місце для ін’єкцій
Для того, щоб вводити у ВЕРХ, зразок спочатку слід розчинити у полярному рідкому розчиннику, переважно такому, що має відомі спектри ВЕРХ, щоб його дані можна було відрізнити від зразків. Рідкий розчин, що містить зразок, поміщають у прилад і направляють у колону. Фактичне розташування місця ін’єкції залежить від марки інструментів. У більшості випадків процес ін’єкції автоматизований, але в деяких випадках працівник лабораторії повинен вводити зразок за допомогою маленької голки шприца.
Компонент насоса
Компонент насоса блоку ВЕРХ необхідний, оскільки він забезпечує тиск, який рухає зразок через колонку. Міцність насоса варіюється, але потужний може створювати тиск до 6000 фунтів на квадратний дюйм або фунтів на квадратний дюйм, який застосовується після введення зразка. Це дозволяє зразку проходити через колонку швидше та ефективніше, ніж якби він капав крізь силу сили тяжіння.
Опис стовпця
Збільшена швидкість зразка, пропущеного через колонку насосом, дозволяє використовувати колонку іншого типу, ніж ті, що використовуються у простій рідинній хроматографії. Матеріал упаковки в колонці може мати набагато менший розмір частинок, що збільшує площу поверхні і, отже, сприяє взаємодії зразка з колонкою. Більшість колонок ВЕРХ працюють через полярність. Зразок розчиняється в полярному розчиннику, і колонка складається з переважно неполярних вуглеводнів. Полярні частини молекули зразка дуже швидко проходять через колонку, оскільки вони в основному взаємодіють з розчинник, тоді як неполярні компоненти зразка затримуються в колонці, утворюючи слабкі взаємодії з колонкою компоненти. Отже, компоненти зразка відходять від стовпця в порядку від найбільш полярних до найбільш неполярних.
Функція детектора
Детектори також різняться залежно від типу використовуваного приладу ВЕРХ. Однак більшість функціонують однаково базово. Джерело ультрафіолетового світла просвічує окремі компоненти зразка, коли вони відриваються від колони. Більшість органічних сполук поглинають певну кількість світла, тому, проходячи повз нанесений промінь світла, детектор може визначити, скільки світла поглинається. Детектор також реєструє час утримання компонентів залежно від порядку, в якому вони відходять від колони. Потім цей результат можна проаналізувати на основі площі піку, щоб визначити точну природу компонентів зразка.