Bilim adamları ve teknisyenlerin genellikle bir süspansiyondaki hücre konsantrasyonunu hesaplamaları gerekir. Örneğin, bir hasta bir doktorun ofisinde kanını aldırdığında, laboratuvar belirli bir kan hacmindeki beyaz kan hücrelerinin miktarını aramak için belirli yöntemler kullanabilir. Bu, doktora hastasının sağlığı, özellikle bağışıklık sistemi ve bir enfeksiyonla mı yoksa başka bir hastalıkla mı savaştığı hakkında birçok bilgi verir. Bunun gibi testler, kandaki diğer birçok hücrenin yanı sıra omurilik sıvısı ve doğurganlık amacıyla menide sperm hücresi sayımı gibi diğer vücut sıvılarını da arayabilir. Bilim adamları ayrıca ekolojik araştırmalardan endüstriyel teknolojilere kadar çeşitli amaçlar için bakteri, maya ve diğer mikroorganizmaların hücre konsantrasyonlarını hesaplar. En yaygın tekniklerden biri de birçok üniversite biyoloji dersinde öğretilir ve sayma odası adı verilen bir cihaz kullanır.
Hücre süspansiyonu sayma odasına girmeden önce, binlerce veya milyonlarca hücre içerebileceğinden seyreltme gerekebilir. Bu durumda, hücreler makul bir şekilde sayılamaz. Numuneyi seyreltmek için, 90 mikrolitre seyreltici içeren bir test tüpüne on mikrolitre hücre çözeltisi yerleştirmek için steril bir pipet kullanın. Seyreltici tipi hücre tipine bağlı olacaktır. İyice karıştırın. Bu çözelti şimdi ilk numuneden on kat daha fazla seyreltilmiştir, bu nedenle seyreltme faktörü 10'dur.
-1. Etiketle. Çözelti yeterince seyreltilene kadar her seferinde steril bir pipet kullanarak bunu birkaç kez tekrarlayın. İkinci kez seyreltilirse, ikinci test tüpü ilk çözeltiden 100 kat daha fazla seyreltildi, bu nedenle seyreltme faktörü 10'du.-2 ve benzeri.Sayım odası için doğru seyreltme faktörünü belirlemek için birkaç seyreltme denemeniz gerekebilir. Bir sayma odası, temelde çok küçük, net, dikdörtgen bir kutudur ve kesin bir derinliğe ve üstte kesin bir ızgaraya sahiptir. Hemositometre veya bazen hemasitometre olarak da bilinir. Amaç, süspansiyonun, sayım odasında görüntülendiğinde hiçbir hücrenin üst üste gelmemesi ve ızgara boyunca düzgün bir şekilde dağılması için yeterince seyreltilmiş olmasıdır. Hücreleri içeren seyreltilmiş süspansiyonu, kılcal etki yoluyla ızgara odasına yerleşeceği sayma odasındaki kuyuya pipetleyin. Sayma odasını mikroskop sahnesine yerleştirin ve düşük güçte görüntüleyin.
Izgara, daha da küçük karelerden oluşan kareler içerir. Dört köşe ve bir orta kare gibi seçtiğiniz bir düzende yaklaşık dört veya beş kare veya en az 100 hücre saymanız gereken sayıda kare seçin. Hücreler büyükse, bunlar büyük kareler olabilir, ancak hücreler küçükse, bunun yerine daha küçük kareleri seçebilirsiniz.
Her ızgara karesinin özgül hacmi, bölme üreticisinin sayılmasına göre değişebilir, ancak genellikle bölmenin derinliği 0,1'dir. milimetre, büyük karelerin alanı 1 milimetre kare ve küçük karelerin alanı 0.04 karedir. milimetre. O halde daha büyük karelerin hacmi 0,1 küp milimetredir. Bu örnek için, beş karede toplam 103 hücre saydığınızı ve ilk numuneyi seyreltme faktörü 10 olana kadar seyrelttiğinizi varsayalım.-2.
Her ızgara karenin hacmi 0.1 milimetre küp ise ve beşi sayılırsa, o zaman sayılan odanın toplam hacmi 0,5 milimetre küptü ve 103 hücre vardı. 1 milimetre küp yapmak için ikiye katlandığında 206 hücre olur. Bir santimetre küp, sıvılar için faydalı bir ölçüm olan 1 mililitreye eşittir. Bir santimetre küpte 1.000 milimetre küp vardır. Bu nedenle, bir santimetre küp veya bir mililitre süspansiyon olsaydı, 206.000 (206 x 1.000) hücre saymış olurdunuz. Denklem olarak böyle görünüyor:
Izgara kare hacmi × sayılan kare sayısı = sayılan süspansiyonun toplam hacmi
Hücre sayısı ÷ sayılan süspansiyon hacmi = küp olarak milimetre başına hücre sayısı
Milimetre küp başına hücre sayısı × 1000 = mililitre başına hücre sayısı
İlk çözeltiyi mikroskop altında sayılabilir hale getirmek için yapılan herhangi bir seyreltmeyi hesaba katmanız gerekecektir. Bu örnekte, seyreltme faktörü 10'dur.-2. Çözeltinin başlangıç konsantrasyonunu hesaplamak için:
Mililitre başına hücre sayısı ÷ seyreltme faktörü = Hücre konsantrasyonu
Bu örnek için, mililitre başına hücre sayısı 206.000'dir ve bunu 10'a böleriz.-2 (0.01), ilk numunede mililitrede 20.600.000 hücrelik bir hücre konsantrasyonu verir.