DNA
Deoksiribonükleik asit ve proteinler. DNA, her biri belirli bir RNA veya protein dizisini kodlayan gen adı verilen birimler halinde düzenlenir. Biyolojik yapı ve işlev, evrim, hastalık ve canlı sistemlerin diğer birçok yönü hakkında bilgi edinmek için genler üzerinde çalışılır. Genleri ayrıntılı olarak incelemek için DNA, ilgili hücrelerden izole edilmeli ve saflaştırılmalıdır.
DNA Ekstraksiyonu
Tek bir hücreden DNA elde edilip çalışılabilse de, çıplak gözle görmek yeterli değildir. Biriktirme için yeterli bir miktar elde etmek için, ne kadar çok hücreyle çalışmanız gerekiyorsa o kadar iyidir (milyonlarca).
Kesin protokoller, belirli numunelerin benzersiz özelliklerini hesaba katmak için önemli ölçüde değişir, ancak genel adımlar homojenleştirme, parçalama, parçalama, ayırma ve toplamadır. Prosedür en iyi şekilde küçük (numunenin boyutuna bağlı olarak) cam veya plastik bir tüp içinde gerçekleştirilir.
Hücreleri birbirinden tamamen ayırmak için bir numune genellikle karıştırılır veya öğütülür. Bu, hücre bileşenlerini takip eden reaktifler için daha erişilebilir hale getirir. Daha sonra, DNA'yı serbest bırakmak için hücre zarlarını (ve hücreler ökaryotik ise nükleer zarları) parçalamak için homojenata deterjan veya enzimler eklenir. Bu noktada DNA, hücrelerde bulunan proteinler, lipidler, karbonhidratlar ve diğer her şeyle çevrilidir.
Proteinleri parçalamak için daha fazla enzimatik sindirim gerekli olabilir, böylece DNA'ya bağlanmazlar ve toplanmasına müdahale etmezler. DNA, soğuk, saf, etil veya izopropil alkol eklenerek hücre içeriğinin geri kalanından ayrılır. DNA bu alkollerde çözünmez, bu nedenle alkolle temasını en aza indirmek için yoğunlaşır. Yoğunlaştırılmış DNA daha sonra genellikle santrifüjleme veya biriktirme yoluyla toplanır.
DNA Biriktirme
Biriktirme yoluyla DNA toplama, bir ekstraksiyon prosedüründen büyük miktarda DNA elde edildiğinde etkilidir. Etkileyici bir saf DNA karmaşası açıkça görülebildiğinden, aynı zamanda mükemmel bir gösteri yöntemidir.
DNA'yı biriktirmek için ayırma adımı dikkatli bir şekilde gerçekleştirilmelidir. Önceden eklenen lizis reaktifi karışımının bir parçası değilse, alkol ekleme adımından önce çözeltiye konsantre bir tuz çözeltisi (sodyum klorür) eklenmelidir. Soğuk alkol, karıştırmadan kaçınarak sulu çözeltinin üzerinde bir tabaka oluşturmak üzere test tüpünün kenarından yavaşça dökülür. Doğru yapılırsa, alkol tuzlu tabakanın üstünde kendi tabakasını oluşturacaktır. Ardından sarma geliyor.
DNA'yı tuzlu katmandan toplamak için, tüpün dibine değene kadar alkol katmanına dikkatlice bir cam karıştırma çubuğu yerleştirin. İki katman arasındaki arayüzü izlerken çubuğu parmaklarınız arasında yavaşça döndürün. Yeterli DNA varsa, sütlü yarı saydam bir kütle oluşturmak için katmanlar arasındaki arayüzde bir araya toplanır. DNA'yı etrafına sarmak için çubuğu döndürün (yani biriktirme kısmı) ve borudan dışarı çekin. DNA, depolama veya daha fazla analiz için başka bir saf alkol tüpüne aktarılabilir.
