Bilim adamları, farklı hücre türleri veya mikroskobik organizmalar arasında ayrım yapmak için akış sitometrisini kullanır. Tıbbi teşhis veya adli patoloji gibi birçok uygulamada kullanılan bir araçtır. Bu deneysel tekniğin gerçekleştirilmesi oldukça kolay olsa da, üretilen karmaşık verilerin analizi çoklu deneysel faktörler ve/veya sitometre nedeniyle akış sitometresi ile daha zordur parametreler. Bu nedenle, CELLQuest veya FlowJo gibi karmaşık profesyonel programlar kullanılarak sitometrik verilerin görselleştirilmesi ve analiz edilmesi rutin bir işlemdir. Bunlar tarafından üretilen sonuçları anlamak için akış sitometri teknikleri, makineler ve yazılımlara aşinalık gereklidir. deneyler.
"Araştırılan soru veya hipotez neydi?" diye sorarak deneyin amacını netleştirin. Bu olacak istatistiksel sitometri kullanarak daha fazla analiz için ham sonuçları uygun formata ve ayarlara ayarlamak için gereklidir yazılım. Verilerin ilgili ayarlarla görüntülenmesi için gerekli değişiklikleri yapın (örn. pozitif hücreler, negatif kapılar, floresan yoğunluğu, hücre popülasyonları vb.).
Kapıları bulun. Hücreler gruplandırılabilir veya bir yoğunluk grafiği veya kontur diyagramında birlikte kümelenmiş olarak gözlemlenebilir. Gruplar genellikle kimliklerine bağlı olarak ayrılır. Bir grup, belirli bir belirteç veya antikor için çok yoğun boyanırsa, o grubun üyelerinin hepsinin, o belirteci ifade eden spesifik hücre tipinin kimliğine sahip olduğu sonucuna varılır. Bu belirteçlerin birden fazlası için pozitif olan hücreler bulmak yaygındır ve bu hücreler genellikle bir ara maddedir ve "çift pozitif" olarak belirtilir.
Dağılım grafiklerine bakın. Bir dağılım grafiğinde hücre gruplarının yayılma şekli, hücrelerin boyutunun bir göstergesidir. Çok büyük veya yüksek saçılımlı hücreler tipik olarak büyük hücrelerdir; bununla birlikte, yüksek oranda sitoplazma içerdikleri için büyük olabilirler veya çok büyük bir çekirdeğe sahip oldukları için yüksek olabilirler. Araştırılan biyolojiye bağlı olarak, bu elbette deneyler arasında büyük farklılıklar gösterecektir.
Rakamlara bakın. Sayıları Y ekseninde tutarken bir eksende (genellikle X ekseni) farklı parametreleri görüntülemek için grafikleri ayarlayın. Bu, belirli bir parametre için pozitif olan örnek popülasyonun oranını gösterir. pik normalde negatif kontrolde bulunmayacak olan pozitif boyanmış bir numunede gözlemlenecektir. örneklem.
Çok parametreli histogramlara bakın. X eksenini ve Y eksenini her birine ayarlayarak, farklı bir parametreyi temsil eder. Deney sırasında incelenirse, özelliklerin daha derinden anlaşılması mümkündür. örnek. Örneğin, X eksenini kırmızı flüoresansa ve Y eksenini yeşil flüoresansa ayarlayarak, kadran tarzı kapılar hesaplanabilir. Hücrelerin mevcut olduğu ve kırmızı veya yeşil flüoresans için boyandığı, her iki renkte veya hiçbir yerde olmadığı bir kadranın dört bölgesini göstermek için herşey. Bu, heterojen bir numunenin bileşen parçalarına bölünmesine ve örtüşen varlıkların görselleştirilmesinin yanı sıra nicelleştirilmesine izin verir.
Referanslar
- “Akış Sitometrisi Verilerinin Analizi”; Susan Sharrow; 1991
- “Akış sitometrisi: enstrümantasyon ve veri analizi”; Marvin Van Dila; 1985
- “Akış sitometri protokolleri”; Teresa ve Robert Hawley; 2004
yazar hakkında
Palmer Owyoung, San Diego'daki California Üniversitesi'nden uluslararası işletme alanında yüksek lisans derecesine ve Santa Barbara'daki California Üniversitesi'nden sosyoloji lisans derecesi ve eğitimli bir moleküler bilim adamıdır. biyolog. 2006'dan beri serbest yazarlık yapmaktadır. Yazmaya ek olarak, tam zamanlı bir Forex tüccarı ve İnternet pazarlamacısıdır.
Fotoğrafa katkı verenler
Puantiyeli RF/Pulka Dot/Getty Images