Bir örneği mikroskop altına koymadan önce boyamanızın ana nedeni, ona daha iyi bakmaktır, ancak boyama, hücrelerin ana hatlarını vurgulamaktan çok daha fazlasını yapar. Bazı lekeler hücre duvarlarına nüfuz edebilir ve hücre bileşenlerini vurgulayabilir ve bu, bilim adamlarının metabolik süreçleri görselleştirmelerine yardımcı olabilir. Lekeler ayrıca canlı hücreler ile ölü hücreleri ayırt etmeye yardımcı olur. Ayrıca boyama, bilim adamlarının belirli bir biyokütle içindeki belirli bir türdeki hücre sayısını saymasına olanak tanır. Yirmi veya daha fazla farklı leke türü vardır ve her birinin bir amacı vardır.
TL; DR (Çok Uzun; Okumadım)
Boyamanın temel amacı hücreleri ve hücre kısımlarını vurgulamaktır. 20'den fazla farklı leke türü vardır ve kullandığınız leke türü aradığınız şeye bağlıdır.
Leke Çeşitleri
Leke seçimi, aradığınız şeye bağlıdır. Tüm boyalar canlı hücreler için uygun değildir, ancak Bismarck kahverengi, toluen kırmızısı, Nil mavisi ve Nil kırmızısı ve DNA'yı vurgulamak için kullanılan belirli floresanları içerenler. Bazı lekeler sporları vurgular, bazıları lipitleri ve proteinleri tespit eder ve bazıları nişasta varlığında renk değiştirir. Muayenenin amacı, kullanılacak en iyi leke tipini belirler. Örneğin, PAP yayması yapan bir tıp doktoru Eosin Y'yi kullanır. Kırmızı kan hücreleri, sitoplazma ve hücre zarlarıyla temas ettiğinde kırmızıya dönen asidik bir floresan boyadır. Ayrıca kan iliğini test etmek için kullanılır.
Bazı durumlarda, bir araştırmacı birden fazla leke kullanabilir. Örneğin hematoksilen, hücre çekirdeğini maviye çeviren bir lekedir. Hücrenin diğer kısımlarını kırmızıya veya pembeye çeviren eozin ile birlikte kullanıldığında daha güçlü bir kontrast sağlar ve çekirdeklerin farklılaşmasını kolaylaştırır. Bu iki leke birlikte kullanıldığında PAP smear ve kan iliği örneklerinin incelenmesi daha kolaydır.
Gram lekesi: Hastane çalışanları, zararlı bakterileri tanımlamak için Gram'ın boyasını kullanır. Bu aslında farklı bakteri türleri üzerinde farklı etkileri olan ve doktorlara önemli bir teşhis aracı sağlayan bir dizi renklendiricidir. Gram boyaması üç aşamalı bir işlemdir. İlkinde, tüm bakterileri tek tip bir menekşe rengine boyayan Hucker'ın kristal menekşesi eklenir. Bir sonraki aşamada, rengin öncelikle Staphylococcus ve Streptococcus olan Gram pozitif hücrelere yapışmasına neden olan iyot boyası eklenir. Leke yıkanarak, Gram-pozitif hücrelerde belirgin bir menekşe rengi bırakarak uzaklaşır; daha sonra Gram negatif bakteriler ile slayttaki materyalin geri kalanı arasındaki kontrastı arttırmak için üçüncü bir leke olan Safranine O eklenir.
Boyama Prosedürü
Bir slayt üzerinde numune hazırlarken, kuru veya ıslak monte edebilir, ince bir kesite kesebilir veya smear yapabilirsiniz. Leke kullanırken, olağan prosedür, numuneyi ıslak olarak monte etmektir; bu, lam üzerine bir damla su yerleştirmek, numuneyi suya koymak ve bir lamel ile kapatmaktır. Daha sonra lekeyi bir damlalık ile lamın bir köşesine uygulayın ve kılcal hareketle numuneye doğru çekilmesine izin verin. Suyu çekmek için kaydırağın karşı tarafına kağıt havlu koymak yardımcı olur. Leke tüm lam üzerine yayıldığında numune incelemeye hazırdır.