Sıvı besin suyu, Escherichia coli gibi bakteri kültürü için kullanılır. Bu çorba için tarifler bakteri türüne ve antibiyotik direnci gibi genetik modifikasyonların varlığına bağlı olarak değişir. Et suyu, bakterilerin farklı koloniler oluşturmasını sağlayan agar eklenerek katılaştırılabilir, oysa sıvı kültürde hacim boyunca dağılırlar. Bu, gen klonlama veya mikrobiyolojik testler gibi ileri yöntemler için temel fakat gerekli bir tekniktir. Bu makale, standart laboratuvar Escherichia coli suşlarının Luria broth (LB) agar plakalarında (veya petri kaplarında) kültürleneceğini varsaymaktadır.
10 gram bakteri sınıfı tripton, 5 gram maya özütü, 5 gram sodyum klorür, 15 gram agar veya agaroz ve 1 mililitre İN sodyum hidroksit tartın. Bunları 1 litre besiyeri elde edilene kadar bir hacim damıtılmış ve otoklavlanmış steril su ile karıştırın. Ortamı gevşek kapaklı şişelerde veya şişelerde 25 dakika otoklavlayın. Antibiyotikler veya diğer besin takviyeleri gibi yüksek ısıda yok edilecek reaktifleri eklemeden önce yaklaşık 50 santigrat dereceye soğumaya bırakın.
Otoklavlanmış ortamın 50 santigrat dereceye ve 45 santigrat derecenin altına düşmemesine izin verin, çünkü agar dökülmeden önce kabına yerleşecektir. Steril petri kapları alın ve plakanın tüm yüzey alanını ve derinliğinin en az yarısını kaplayacak kadar dökün. Plakaları aşırı doldurmaktan kaçının ve tercihen agarın tabağın üst kenarına temas etmesine izin vermeyin. Kapakları kapalı ve başlığın bir köşesine bırakarak plakaların steril bir ortamda (örneğin laminer akış başlığı altında) katılaşmasına izin verin.
Plakaları kurutun. Plakalar yerleştirildiklerinde hemen kullanılabilse de, agar yüzeyinde bakteri kolonilerinin yeterince yapışmasını önleyecek bir miktar nem bulunacaktır. Bu nedenle, herhangi bir bakteri uygulamadan önce plakaları kurutmak en iyisidir, örneğin onları dışarıda oturmaya bırakarak. birkaç gün veya yarım saat boyunca laminer akışlı davlumbaz altında veya 37 santigrat derece sıcaklıkta oda sıcaklığında kuluçka makinesi.
Plakaları saklayın. Kurutulmuş tabaklar, kapakları üzerine baş aşağı (ters çevrilmiş) şekilde istiflenmeli ve orijinal hallerine geri döndürülmelidir. ambalajlanmış, bantlanmış ve ışıktan korumak için folyoya sarılmış veya uygun bir konteyner. Plakaların üzerine her zaman hazırlanma tarihini yazın ve plakalar 2 aydan eski ise kullanmaktan kaçının.
Referanslar
- "Moleküler Biyolojinin Güncel Protokolleri"; Karen Elbing ve Roger Brent; 2002
İpuçları
- Yukarıdaki adımların çoğunu (tercihen tümü) steril bir ortamda (örn. açık alev veya laminer akış başlığı) havadaki bakteriyel kirleticilerin içeri girmesini ve büyümesini durdurmak için medya.
yazar hakkında
Palmer Owyoung, San Diego'daki California Üniversitesi'nden uluslararası işletme alanında yüksek lisans derecesine ve Santa Barbara'daki California Üniversitesi'nden sosyoloji lisans derecesi ve eğitimli bir moleküler bilim adamıdır. biyolog. 2006'dan beri serbest yazarlık yapmaktadır. Yazmaya ek olarak, tam zamanlı bir Forex tüccarı ve İnternet pazarlamacısıdır.
Fotoğrafa katkı verenler
Jüpiterimages/Comstock/Getty Images