DNA - deoksiribonükleik asit - bir hücrenin çekirdeğinde bulunan ve genetik bilgi içeren bir moleküldür. DNA'nın çıkarılması, hücreyi nazikçe kırmak, nükleer membranı kırmak, DNA'yı proteinlerden ayırmak ve daha sonra bir çözeltiden çökelmesine neden olmak için bir dizi adımı içerir. Bu, zarların yapısına, DNA'ya ve elektronegatifliğine bağlı olarak çeşitli kimyasallar kullanılarak gerçekleştirilir. Sodyum klorür veya diğer sodyum içeren bileşikler, proteinlerinden sıyrıldıktan sonra DNA'yı stabilize etmek ve çökelmeye yardımcı olmak için kullanılır.
DNA'nın Yapısı
DNA'nın temel yapısı, onları çevreleyen şeker-fosfat omurgalarıyla birlikte dizilmiş iki uzun nükleotit dizisidir. DNA, iplikçikleri düzenli ve karışık tutmak için çeşitli proteinlerle birlikte bükülerek ve kıvrılarak düzenlenir. Doğal durumunda, DNA'nın çevreye en çok maruz kalan kısmı şeker-fosfat omurgasıdır. Hücre içinde bu ortam öncelikle sudur; hangi DNA çözünür. Genel polaritesi nedeniyle suda çözünür.
DNA Polaritesi
"Polarite", elektrik yüklerinin düzensiz dağılımını içeren molekülleri tanımlayan bir kimya terimidir. Cornell Tıp Koleji'nden Paul Zumbo'ya göre, tüm nükleik asitler polardır. DNA durumunda, omurgadaki yüksek polar fosfat grupları negatif yükler taşır. Su aynı zamanda polar olduğundan, bu özellik suda çözünürlüğü hesaba katar. Suyun pozitif yükleri, DNA'nın negatif yükleriyle etkileşir ve bir çözelti oluşturur. DNA'yı daha fazla test veya görselleştirme için geri kazanmak için, DNA'nın suyla bir çözeltiden çökeltilmesi gerekir. Su nispeten zayıf bir pozitif yüke sahip olduğundan, bu, çözeltide daha güçlü bir pozitif yüklü iyon sağlanarak gerçekleştirilir. Sodyum bunun için mükemmel bir adaydır.
Sodyum ve Alkol Kullanılarak DNA Çökeltilmesi
DNA bir hücrenin çekirdeğinden çıkarılıp su ile karışmaya bırakıldıktan sonra, sodyum iyonlarının katılması, sodyum ve omurga arasında geçici bir çekim yaratır. DNA geçici olarak nötralize edilir ve daha sonra sudan kolayca ayrılır. Bu aşamada alkolün eklenmesi DNA ve sodyum iyonlarını daha da sıkı bağlanmaya zorlar çünkü alkol polar değildir. Etanol veya izopropil alkol kullanılabilir. DNA sudan ayrıldığında ve sodyuma sıkıca bağlandığında, çözeltiden çökelecektir. saflaştırma için konsantre edilebileceği veya pürüzsüz bir camın etrafına hafifçe sarılarak görselleştirilebileceği kamış.
DNA Ekstraksiyonundaki Diğer Adımlar
Hücrelerden DNA'ya erişmek için plazma zarını ve nükleer zarı parçalamak, genellikle ilk önce lipit moleküllerini parçalamak için bir tür deterjan ekleyerek gerçekleştirilir. Laboratuvarlarda yaygın olarak kullanılan bir deterjan, SDS veya sodyum dodesil sülfattır; ancak basit ekstraksiyonlar için bulaşık deterjanı bile kullanılabilir. Hücreler bitki materyalinden türetilmişse, hücre duvarını sindirmek için genellikle enzimler de eklenir.