Bir virüs için titreyi hesaplamak, bir bilim insanının belirli bir örnekteki virüslerin sayısını saydığını söylemenin karmaşık bir yoludur. Virüs titrelerini hesaplamak için bilim adamları, büyüyen bakteri plakalarını değişen konsantrasyonlarda viral çözeltilerle enfekte eder ve viral nedeniyle ölen bakterileri sayarak orijinal çözümdeki virüslerin sayısını anlayın. enfeksiyon.
Eldiven giyin, 10 kültür tüpünü 9 ml et suyu ile doldurun ve "10^-1", "10^-2", "10^-3" olarak etiketleyin ve "10^-10"a kadar devam eder. Bu tüpler, faj hesaplamak için kullanılan viral seri seyreltmeler için kullanılacaktır. titre. Virüsler inanılmaz derecede yüksek konsantrasyonlara kadar büyüyebildiğinden, onları etkili bir şekilde saymak için seyreltmeniz gerekir. Her tüp, virüsün on kat seyreltmesini temsil eder.
“10^-1” etiketli tüpünüzden 1 ml karışık kültür alın ve yeni bir pipetle “10^-2” etiketli bir sonraki tüpe aktarın. Bu tüpü de karıştırın.
Seri bir seyreltme serisi oluşturmak için bu desene devam edin. 9 ml'lik 9 tüp ve 10 ml'lik 1 tüp elde edeceksiniz. Tüplerinizdeki viral yükler, 10 kat (ilk tüpünüz) veya 100 kat (ikinci tüpünüz) ile on milyar kat (son tüpünüz) arasında herhangi bir yerde seyreltilecektir.
Agarınıza iki damla bakteri kültürü ekleyin ve nazikçe karıştırın. Bunlar, belirli bir çözeltideki virüs parçacıklarının sayısını saymanıza olanak tanıyan öldürülecek bakterilerdir.
Tüpler hala sıcak su banyosundayken ilgili agar tüpüne her seri dilüsyondan 1 ml ekleyin. Örneğin, 10^-1 seri seyreltmenizin 1 ml'si "10^-1" etiketli agar tüpüne gitmelidir.
Her tüpü karıştırın ve ardından her tüpü ilgili etikete sahip Petri plakasına dökün. Bu, her plakada bakteri ve virüslerle aşılanmış ince bir agar tabakası oluşturacaktır. Plakaların bir kuluçka makinesinde bir gecede büyümesine izin verin.
Plakalarınızı kuluçka makinesinden çıkarın ve inceleyin. Plak adı verilen küçük berrak noktalar dışında, plak boyunca bakterilerin büyüdüğü bulutlu alanlar görmelisiniz. Bu plaklar ölü bakteri parçalarıdır ve her plak bir virüsü temsil eder.
Tabağınızdaki plaka sayısını alın ve 10 ile çarpın. 157 plaket sayarsan, 1570 alırsın.
Bir önceki adımda elde ettiğiniz sayıyı seyreltme tüpünüzdeki sayının tersi ile çarpın. Örneğin, seçtiğiniz plaka 10^-5 plakasıysa, 157000000 elde etmek için 1570'i 10^5 ile çarparsınız. Bu son sayı sizin faj titrenizdir ve orijinal kültürünüzün ml'si başına virüs sayısını temsil eder.