İmmünoblotlama olarak da adlandırılan Western blot testi, bir protein karışımı içindeki belirli bir protein için yapılan bir testtir. Western blot testi, jel elektroforez veya enzime bağlı immünosorbent testi (ELISA) testinden sonra gerçekleştirilir ve spesifik proteinleri tanımlamak için antikorları kullanır.
Sodyum dodesil sülfat poliakrilamid jel elektroforezi (SDS-PAGE), Western blot'ta kullanılmak üzere proteinleri ayırmak için kullanılan yaygın bir testtir. Proteinler, bir jel matrisi boyunca hareket ederken ağırlık ve elektriksel özelliklere göre ayrılır.
ELISA testi, test yüzeyini oluşturmak için katı bir yüzeye bağlı enzimleri veya antikorları kullanır. Daha sonra test yüzeyine bir numune eklenir. Proteinlere reaksiyona giren veya bağlanan antikorlar veya enzimler, pozitif bir sonucu gösterir.
Western blot testi, jel elektroforezinden sonra gerçekleştirilir. Ayrılan proteinler nitroselüloz veya naylon membranlar üzerine aktarılır (veya lekelenir) ve ikincil bir protein tarafından etiketlenen spesifik antikorlar tarafından tanımlanır.
Western blot testi, jel elektroforez veya ELISA testlerinden elde edilen pozitif sonuçları doğrulamak için kullanılır. Western blot testi, proteinleri daha spesifik olarak tanımlayabilir ve yanlış pozitifleri ekarte edebilir.