Seyreltmeden CFU Nasıl Hesaplanır

Öğretmeniniz size bir bakteri örneği verir ve size sorar: Bu örnekte kaç tane canlı mikroorganizma var? Bu ne anlama geliyor ve bunu nasıl anlıyorsunuz? Bir yöntem, sayısını bulmaktır. koloni oluşturan birimler(CFU).

CFU, bir ortam plakası üzerinde büyüyen herhangi bir mikroorganizmanın tek tek kolonilerinin sayısını ifade eder. Bu değer, plaka üzerinde koloniler oluşturdukları için çoğalabilen bakteri sayısını temsil eder. Örneklemeyi içeren bir CFU formülü vardır.

Sıvı bir numunedeki bakteri sayısını saymak çok zordur. Onlardan çok fazla var ve çok küçükler. Ayrıca, bazıları ölü, bazıları diri olabilir ve ölüler toplamdan sayılmaz. sadece ilgilendiğin canlı bakteri veya çoğalabilen bakteriler. Peki kaç bakteriniz olduğunu nasıl anlayabilirsiniz?

Aynı şekilde 1.000 kişilik bir anket yapabilir ve belirli bir konu hakkında nasıl düşünebileceklerini anlamak için bunu 10.000 kişiye uygulayabilirsiniz. Orijinal numunenizin küçük bir kısmını deneyebilir ve alabilir, içinde kaç bakteri olduğunu anlayabilirsiniz. bu kısmı ve ardından orijinalde kaç tane olabileceğini tahmin etmek için hesaplayın. örneklem.

Belirli bir numunenin CFU'sunu bulma prosedürü, önce o numunenin seyreltilmesini içerir. Seyreltmeler daha sonra doğru büyüme ortamı ile plakalar üzerine kaplanır. Orijinal numune çok konsantre olabileceğinden, çoklu seyreltmeler genellikle iyi bir fikirdir.

Bakterilerin belirli bir süre plakalar üzerinde büyümesine izin verdikten sonra, bireysel koloniler bir tabakta sayılır. Numune çok konsantre ise, tek tek koloniler yerine bakteri üremesiyle kaplı geniş bir alan göreceksiniz. çim. Bu, numunenizi daha fazla seyreltmeniz ve tek tek kolonileri görebilmeniz için yeniden büyütmeyi denemeniz gerektiği anlamına gelir.

Tek tek koloniler, kendisini defalarca çoğaltan tek bir bakteriden geldiğinden, yalnızca bunlar CFU'ya sayılır.

Bir CFU hesaplaması yapmak için seyreltme kullanmanın bir örneği şu şekilde olabilir: İlk olarak, öğretmeninizin size verdiği ilk numuneden 1 mL alıp plakalayın. Ertesi gün bir bakteri çimi olduğunu görüyorsunuz. Bu, CFU sayısını sayamayacağınız anlamına gelir. Bir sonraki adım, bazı seyreltmeler yapmaktır.

İlk önce 1 mL numune alın ve 9 mL sıvı besiyerinde seyreltin. Seyreltme, bir kısım numuneden dokuz kısım seyrelticiye kadar olduğundan, 1:10 seyreltme olarak adlandırılır. Ardından 1:10 dilüsyondan 1 mL alın ve bunu 9 mL sıvı ortama ekleyin. Bu seyreltme 1:100 seyreltmedir. Son olarak 1 mL 1:100 seyreltme alıp 9 mL sıvı ortam ekleyerek 1:1000 seyreltme yaparsınız. Her seyreltme için artık 10 mL seyreltilmiş bakteri kültürünüz var.

Seyreltmeler yapıldı, dilüsyonların 0,5 mL'sini plakalara plakalayın. Seyreltmenin kaplandığı plakaları etiketlediğinizden emin olun.

Ertesi gün geri döndüğünüzde, tüm plakaların üzerlerinde bazı ayrı koloniler olduğunu görüyorsunuz. arasında bir tabak seçmek istiyorsun 30 ve 300 koloni. 1:1000 seyreltme plakasının yaklaşık 10 koloniye sahip olduğunu görüyorsunuz, bu da numuneyi fazla seyrelttiğiniz anlamına geliyor. O plaka CFU'yu bulmada yardımcı olmayacak.

1:10 seyreltme plakasının birçok kolonisi vardır, belki 300'den fazla. Bu durumda 1:100 plakasına geçebilirsiniz. Bu plakadaki kolonileri sayarsınız ve 179 koloniye sahip olduğunu görürsünüz. Bu, 1:100 seyreltmenin 0,5 mL'sinin 179 CFU içerdiği anlamına gelir. Peki ya orijinal örnek?

Artık bazı verileriniz olduğuna göre, orijinal örnekte CFU hesaplamasını yapabilirsiniz.

1. Kaplama yaptığınız miktarı (0,5 mL) alın ve 0,005 elde etmek için seyreltme faktörü (0.01) ile çarpın. CFU sayınızı veren seyreltme faktörünü bulmak için bunu yapmalısınız. Burada, 1:100 seyreltmenin yarım mililitresi CFU'yu saymanıza izin verdi.

2. Seyreltmeden (179) CFU'yu Adım 1'in (0.005) sonucuyla bölün ve 35.800 CFU elde edin.

Bu, seyreltilmiş orijinal 1 mL numunenin 35.800 CFU içerdiği anlamına gelir. Bunu söylemenin başka bir yolu, orijinal numunenin 35.800 CFU/mL'ye sahip olduğunu söylemektir.

CFU, belirli bir numunede kaç tane bakteri, mantar veya herhangi bir mikroorganizma olduğunu bulmak için harika bir araçtır. Burada açıklanan kaplama yöntemi, sıvı kültürde iyi gelişmeyen çok konsantre numuneler veya organizmalar için özellikle yararlıdır.