Bakteriler, yükseltilmiş dairesel kolonilerin oluştuğu bakteri agar olarak bilinen katı bir ortam üzerinde Petri kaplarında büyütülür. Tek bir bakteri hücresinden farklı olarak koloni, çıplak gözle görülebilecek kadar büyük bir bakteri grubudur. Bakteriyel büyüme, kaç tane koloninin bulunduğunun basit bir şekilde gözlemlenmesiyle ölçülebilir; bununla birlikte, daha nicel yöntemler, bir sayım odasının kullanımını veya daha sık olarak uygulanabilir plaka sayımlarını içerir. İkincisi, değişen büyüme koşullarının etkisi gibi niteliksel bilgiler sağladığı için en sık kullanılır. Bir petri kabında milyarlarca bakteri olabileceğinden, ilk olarak ölçüm yapmak için numunenin seyreltilmesi gerekir, böylece koloni sayısını saymak mümkün olur.
Bir test tüpünde, 90 mikrolitre seyreltme ortamına 10 mikrolitre başlangıç bakteri kültürü ekleyin. Tüpün kapağını sıkıca kapatın ve homojen bir karışım elde etmek için hafifçe vorteksleyin. Şimdi numune, orijinal konsantrasyonunun onda biridir.
Bu yeni örneğin 10 mikrolitresini 90 mikrolitre seyreltme ortamı içeren yeni bir test tüpüne aktarın ve tekrar karıştırın. Bir kez daha, sonuç daha fazla seyreltilmiş numune olacaktır - şimdi orijinal konsantrasyonunun yüzde biri olacaktır. Orijinal numune 10 ila 10 arasında seyreltilene kadar bunu birkaç kez tekrarlayın.
4 ve 1010 zamanlar. Her tüpün doğru dilüsyonla etiketlendiğinden emin olun, örneğin 10-1, 10-2 ve benzeri.Tamamlanan son seyreltmenin 10 mikrolitresini agar plakasına dağıtın. Yayma kenarını kullanarak bakteriyel solüsyonu agar plakasının tüm yüzeyine dağıtın. Bunu iki tabak için daha tekrarlayın. Karşılaştırma için bu adımların diğer seyreltme seviyeleriyle uygulanması da yaygındır. Plakaların altlarını etiketlediğinizden emin olun. Her plakanın üzerindeki kapakları değiştirin ve agar plakalarının alevin altındaki bir laboratuvar tezgahında veya bir inkübatörde birkaç dakika kurumasını bekleyin. Plakaları bakteri suşu için uygun sıcaklığa ayarlanması gereken inkübatöre yerleştirin. 12 ila 16 saat büyümeye bırakın.
Koloniler 16 saat sonra görünür olmalıdır; ancak bazı genetik modifikasyonlar daha uzun süre gerektirebilir (örneğin, renk gelişimi). Koloniler gözlemlenebilir olduğunda, plakaları çıkarın ve 30 ile 300 arasında koloniye sahip olanları bulun. Kalıcı bir işaretleyici kullanarak, petri kabının altına - kapağın değil, agarın olduğu tarafa - agardan bir koloninin göründüğü her yere bir nokta koyun. Her işaretçi noktasını sayın. Her yemek için tekrarlayın.
Bu deney için başlangıç kültüründeki bakteri miktarını ölçmek için, seyreltmenin hesaplamalarda iki yerde tersine çevrilmesi gerekir. İlk olarak, petri kabına koymak için test tüpünden bir mikrolitre aldığınızda, seyreltilmiş numunenin onda birini aldınız, yani bunu tersine çevirmek için her şeyi 10 ile çarpmanız gerekiyor. Ayrıca test tüpündeki seyreltme faktörü örneğin 10 ise-7, o zaman koloni sayısı 10 ile çarpılmalıdır.7 seyreltme etkisini tersine çevirmek için. Hesaplamalarda üsten eksi işaretini kaldırmanız yeterlidir. Formülü kullanın:
[Sayılan koloni sayısı] × 10 × [orijinal konsantrasyona ulaşmak için numunenin kaç kez çarpılması gerekir: örneğin, 105] = Başlangıç kültürünün mililitresi başına koloni oluşturan birimlerin (CFU) sayısı. Bu, petri kaplarınızdaki bakteri üremesidir.
