Enzimatik testin ilk test tüpünden alınan veriler için zamana karşı ürün konsantrasyonu grafiğini çizin. Not: yatay eksen "zaman" ve dikey eksen "ürün konsantrasyonu" olmalıdır.
Bölüm 1, Adım 1'de çizdiğiniz veri noktaları için doğrusal regresyon çizgisini hesaplayın. Excel ve grafik hesap makineleri bu doğrusal modeli kolayca belirleyebilirken, regresyonun bir tahminini elde edebilirsiniz. bitişik veri noktaları arasındaki ürün konsantrasyonu farkını zaman farklarına bölerek çizginin eğimi.
Bölüm 1, Adım 2'deki lineer regresyon çizgisinin eğimini "başlangıç reaksiyon hızı (Vo)" olarak kaydedin. Not: "[ürün konsantrasyonu] = m [zaman] + b" regresyon çizgisi modelinde, "m" katsayısı, eğim.
Testteki test tüplerinin geri kalanı için Adım 1, 2 ve 3'ü tekrarlayın.
Her test tüpü için substrat konsantrasyonunun tersini, ilk reaksiyon hızının tersi ile çizin (Bölüm 1, Adım 4'ten). Örneğin, başlangıç substrat konsantrasyonu 50 mikromolar olan bir test tüpünün başlangıç hızı (uM) 80 uM/s idi, tersi, substrat konsantrasyonu için 1/50 uM ve başlangıç için 1/80 uM/s olacaktır. hız. Not: Ters substrat konsantrasyonu yatay eksende ve ters başlangıç hızı dikey eksende olmalıdır.
Not: substrat konsantrasyonu yatay eksende ve ilk reaksiyon hızı dikey eksende olmalıdır.
Bölüm 2, Adım 1'de çizdiğiniz grafik için doğrusal regresyon çizgisini belirleyin. Not: Regresyon doğrusu için y-kesişimini bilmeniz gerekeceğinden, noktaları şuradan girmelisiniz: Bölüm 2, Adım 1'i Excel'e veya bir grafik hesap makinesine dönüştürün ve yerleşik regresyon modellemesini kullanın işlevsellik.
1'i doğrusal regresyon çizgisinden y-kesişimine bölün. Bu size enzim için maksimum reaksiyon hızı olan Vmax'ın tersinin değerini verecektir. Not: Doğrusal regresyon modeli "[Ters Vo] = m [Ters Substrate Kons.] + b" şeklini alırsa, "b"nin değeri y-kesişim olacaktır. Vmax'ın tersini hesaplamak için 1'i "b"ye bölün.
Vmax'ın gerçek değerini hesaplamak için 1'i Bölüm 2, Adım 3'teki sonuca bölün.
Orijinal tahlilde enzimin konsantrasyonunu belirleyin (ham verilere bakın). Not: enzim konsantrasyonu, tüm test tüpleri için aynıdır; tahlilde sadece substrat konsantrasyonları değişir.
Vmax'ı (Bölüm 2, Adım 4'ten) enzim konsantrasyonuna (Bölüm 2, Adım 5'ten) bölün. Sonuç Kcat değeridir.
Chicago merkezli bir metin yazarı olan Andy Pasquesi, otomotiv (BMW, MINI Cooper, Harley-Davidson), finansal hizmetler (Ivy Funds, William Blair, T. Rowe Price, CME Group), sağlık hizmetleri (Abbott) ve tüketim malları (Sony, Motorola, Knoll) müşterileri. Harvard Üniversitesi'nden İngilizce Lisans derecesine sahiptir, ancak Oxford virgülünü umursamıyor.