Forskare och tekniker behöver ofta beräkna koncentrationen av celler i en suspension. Till exempel, när en patient drar sitt blod på en läkarmottagning, kan laboratoriet använda vissa metoder för att leta efter mängden vita blodkroppar i en given volym blod. Detta ger läkaren mycket information om patientens hälsa, särskilt hans immunförsvar och om han bekämpar en infektion eller annan sjukdom. Tester som detta kan leta efter många andra celler i blod såväl som ryggvätska och andra kroppsvätskor, såsom spermaceller i sperma för fertilitetsändamål. Forskare beräknar också cellkoncentrationer av bakterier, jäst och andra mikroorganismer för många ändamål, allt från ekologisk forskning till industriell teknik. En av de vanligaste teknikerna lärs också ut i många högskolebiologikurser, och den använder en anordning som kallas en räknekammare.
Innan cellsuspensionen kan gå in i räknekammaren kan den behöva spädas eftersom den kan innehålla tusentals eller miljoner celler. I så fall kan inte cellerna rimligen räknas. För att späda ut provet, använd en steril pipett för att placera tio mikroliter av celllösningen i ett provrör som innehåller 90 mikroliter av ett utspädningsmedel. Typ av utspädningsmedel beror på typen av cell. Blanda det väl. Denna lösning är nu tio gånger mer utspädd än det ursprungliga provet, så dess utspädningsfaktor är 10
-1. Märk det. Upprepa detta flera gånger med en steril pipett varje gång tills lösningen är tillräckligt utspädd. Om du spädde ut den en gång till var det andra provröret 100 gånger mer utspätt än den ursprungliga lösningen, så utspädningsfaktorn var 10-2 och så vidare.Du kan behöva prova flera spädningar för att bestämma rätt utspädningsfaktor för räknekammaren. En räknekammare är i grunden en mycket liten, klar, rektangulär låda med ett exakt djup och ett exakt rutnät inskrivet över toppen. Det är också känt som en hemocytometer eller ibland en hemacytometer. Syftet är att suspensionen ska vara tillräckligt utspädd att inga celler överlappar varandra när de ses i räknekammaren, och de fördelas genom nätet på ett enhetligt sätt. Pipettera den utspädda suspensionen som innehåller cellerna i brunnen i räknekammaren, där den kommer att sätta sig i gallerkammaren genom kapillärverkan. Placera räknekammaren på mikroskopsteget och se den under låg effekt.
Rutnätet innehåller rutor som är gjorda av ännu mindre rutor. Välj ungefär fyra eller fem rutor, eller hur många du behöver för att räkna minst 100 celler, i ett mönster du väljer, till exempel de fyra hörnen och en mittruta. Om cellerna är stora kan det vara de stora rutorna, men om cellerna är små kan du välja de mindre rutorna istället.
Den specifika volymen för varje rutnät kan variera beroende på räkneverkstillverkaren, men ofta är kammarens djup 0,1 millimeter, arean för de stora rutorna är 1 kvadrat millimeter, och arean för de mindre rutorna är 0,04 kvadrat millimeter. De större rutorna har alltså en volym på 0,1 kubikmeter. För det här exemplet antar du att du räknade totalt 103 celler i fem rutor och att du spädde det ursprungliga provet tills utspädningsfaktorn var 10-2.
Om varje rutnät har en volym på 0,1 kubikmillimeter och fem räknades, var den totala volymen för kammaren som räknades 0,5 kubikmillimeter och det fanns 103 celler. Fördubblades för att göra det 1 kubikmillimeter skulle göra det 206 celler. En kubikcentimeter motsvarar 1 milliliter, vilket är ett användbart mått för vätskor. Det finns 1000 kubikmillimeter i en kubikcentimeter. Därför, om det hade funnits en kubikcentimeter eller en milliliter suspension, skulle du ha räknat 206 000 (206 x 1 000) celler. Så här ser det ut som en ekvation:
Volym raster kvadrat × antal räknade rutor = total volym räknat upphängning
Antal celler ÷ volym räknad suspension = cellantal per kubik millimeter
Cellantal per millimeter kubad × 1000 = cellantal per milliliter
Du måste redogöra för utspädning som görs för att göra den ursprungliga lösningen räknad under mikroskopet. I detta exempel är utspädningsfaktorn 10-2. För att beräkna den ursprungliga koncentrationen av lösningen:
Cellantal per milliliter ÷ utspädningsfaktor = Cellkoncentration
För detta exempel är cellantalet per milliliter 206 000 och dividerar det med 10-2 (0,01) ger en cellkoncentration av 20 600 000 celler per milliliter i det ursprungliga provet.