Den främsta anledningen till att du fläckar ett prov innan du lägger det under mikroskopet är att få en bättre titt på det, men färgning gör mycket mer än att bara markera cellens konturer. Vissa fläckar kan tränga igenom cellväggar och markera cellkomponenter, och detta kan hjälpa forskare att visualisera metaboliska processer. Fläckar hjälper också till att skilja mellan levande celler och döda celler. Dessutom tillåter färgning forskare att räkna antalet celler av en viss typ inom en viss biomassa. Tjugo eller flera olika typer av fläckar finns, och var och en har sitt syfte.
TL; DR (för lång; Läste inte)
Huvudsyftet med färgning är att markera celler och delar av celler. Över 20 olika typer av fläckar finns, och vilken typ av fläck du använder beror på vad du letar efter.
Typer av fläckar
Valet av fläck beror på vad du letar efter. Inte alla fläckar är lämpliga för levande celler, men de som inkluderar Bismarck-brunt, toluenrött, Nilblått och Nilrött och vissa fluorescerande ämnen som används för att belysa DNA. Vissa fläckar markerar sporer, vissa upptäcker lipider och proteiner, och vissa ändrar färg i närvaro av stärkelse. Syftet med undersökningen avgör vilken typ av fläck som ska användas. Till exempel skulle en läkare som utför en PAP-utstrykning använda Eosin Y. Det är ett surt fluorescerande färgämne som blir rött när det kommer i kontakt med röda blodkroppar, cytoplasma och cellmembran. Det används också för att testa blodmärgen.
I vissa fall kan en utredare använda mer än en fläck. Hematoxylin är till exempel en fläck som blir cellkärnor blå. När den används i kombination med eosin, som blir de andra delarna av cellen röd eller rosa, ger den en starkare kontrast och gör kärnorna lättare att skilja. PAP-utstryk och blodmärgsprover är lättare att undersöka när dessa två fläckar används tillsammans.
Gram's Stain: Sjukhusarbetare använder Grams fläck för att identifiera skadliga bakterier. Detta är faktiskt en serie färgämnen som har olika effekter på olika typer av bakterier och ger läkare ett viktigt diagnostiskt verktyg. Grams fläck är en tredelad process. I den första tillsätts Huckers kristallviolett, som fläckar alla bakterier i en enhetlig violett färg. I nästa steg tillsätts jodfläckar, vilket får färgen att fästa vid Gram-positiva celler, som främst är Staphylococcus och Streptococcus. Fläcken tvättas bort och lämnar de gram-positiva cellerna med en distinkt violett färg. sedan införs en tredje fläck, Safranine O, för att förbättra kontrasten mellan de gramnegativa bakterierna och resten av materialet i bilden.
Färgningsprocedur
När du förbereder ett prov på en bild kan du torka eller våtmontera det, du kan skära det i ett tunt avsnitt eller så kan du smeta det. När du använder en fläck är det vanliga förfarandet att våtmontera provet, vilket innebär att du placerar en droppe vatten på objektglaset, placerar provet i vattnet och täcker det med ett täckglas. Du applicerar sedan fläcken i ett hörn av bilden med en dropper och låter den dras mot provet genom kapilläråtgärd. Det hjälper till att lägga en pappershandduk på motsatt sida av bilden för att locka vattnet. När fläcken har spridit sig över hela objektglaset är provet klart för undersökning.