Bakterier odlas i petriskålar på ett fast medium som kallas bakteriell agar, där det bildas upphöjda, cirkulära kolonier. Till skillnad från en enskild bakteriecell är en koloni en grupp bakterier som är tillräckligt stora för att vara synliga för blotta ögat. Bakterietillväxt kan mätas genom enkel observation av hur många kolonier som finns; emellertid inkluderar mer kvantitativa metoder användningen av en räknekammare, eller oftare, livskraftiga plattantal. Det senare används oftast eftersom det också ger kvalitativ information såsom effekten av olika tillväxtförhållanden. Eftersom det kan finnas miljarder bakterier i en petriskål, måste mätningen först spädas ut så att det är möjligt att räkna antalet kolonier.
I ett provrör tillsätt 10 mikroliter av startbakteriekulturen till 90 mikroliter utspädningsmedium. Stäng locket på röret tätt och virvla försiktigt för att få en homogen blandning. Nu är provet en tiondel av sin ursprungliga koncentration.
Överför 10 mikroliter av detta nya prov till ett nytt provrör som innehåller 90 mikroliter utspädningsmedium, blanda igen. Återigen blir resultatet att provet späds ut ytterligare - nu blir det en hundradels av sin ursprungliga koncentration. Upprepa detta flera gånger tills det ursprungliga provet har spädts mellan 10
4 och 1010 gånger. Se till att varje rör är märkt med rätt utspädning, till exempel 10-1, 10-2 och så vidare.Tillför 10 mikroliter av den sista utspädningen som slutförts på agarplattan. Använd spridningskanten och fördela bakterielösningen över hela agarplattans yta. Upprepa detta för ytterligare två plattor. Det är också vanligt att utföra dessa steg med andra utspädningsnivåer för jämförelse. Se till att märka plattans botten. Byt ut locken på varje platta och låt agarplattorna torka i flera minuter antingen på en laboratoriebänk under en flamma eller i en inkubator. Placera plattorna i inkubatorn som ska ställas in på lämplig temperatur för bakteriestammen. Låt växa i 12 till 16 timmar.
Kolonier ska vara synliga efter 16 timmar; dock kan vissa genetiska modifieringar kräva längre (till exempel färgutveckling). När kolonier kan observeras, ta ut tallrikarna och hitta dem som har mellan 30 och 300 kolonier. Använd en permanent markör för att placera en prick på petriskålens botten - sidan med agaren, inte locket - varhelst en koloni är synlig genom agaren. Räkna varje prick. Upprepa för varje maträtt.
För att mäta mängden bakterier i startkulturen för detta experiment måste utspädningen vändas i beräkningarna på två ställen. För det första, när du tog en mikroliter från provröret för att lägga i petriskålen tog du en tiondel av det utspädda provet, så du måste multiplicera allt med 10 för att vända det. Dessutom, om utspädningsfaktorn i provröret till exempel var 10-7måste antalet kolonier multipliceras med 107 för att vända utspädningseffekten. Ta bara bort det negativa tecknet från exponenten i beräkningarna. Använd formeln:
[Antal räknade kolonier] × 10 × [hur många gånger provet måste multipliceras för att komma till den ursprungliga koncentrationen: till exempel 105] = Antal kolonibildande enheter (CFU) per milliliter startkultur. Detta är bakterietillväxten i dina petriskålar.
