Електрофореза у гелу је метода која се користи у лабораторијама за одвајање ДНК (дезоксирибонуклеинска киселина). Такође се може користити за одвајање РНК и протеина.
Читање резултата електрофорезе у гелу омогућава истраживачима да одреде величину нити у узорку. Да бисмо разумели како процес функционише, прво морамо научити дефиницију електрофорезе у гелу.
Дефиниција електрофорезе у гелу
Електрофореза у гелу је моћно средство које се користи у молекуларна биологија да се одреди величина и електрични набој ДНК, РНК и протеина. Најпре се користи комадима ДНК који су ензими пробавили из већег ланца ДНК.
Користећи као резултат резултате интензитета гел електрофорезе, можете да утврдите која је величина фрагмената. Тада се може добити а ДНК отисак прста.
Као што открива „електро“ део речи, а дефиниција електрофорезе у гелу подразумева употребу електричног поља. Користи се посебна машина која садржи пуферски раствор који покрива електроде, јажицу за гел да се суспендује унутра и саме електроде.
Гел у електрофорези у гелу
Гел електрофореза захтева употребу гела обликованог у плочу која је обично направљена од пречишћене верзије агара из морских алги која се назива агароза.
Агарозни гелови направити порозну матрицу кроз коју наелектрисани молекули различитих величина могу да путују различитим брзинама. Хемикалија названа етидијум бромид (ЕтБр) додаје се раствору гела пре него што се сипа у калуп.
Ако имате врло мале молекуле ДНК или протеина за одвајање, можда ћете морати да употребите а полиакриламидни гел уместо агарозе. Обратите пажњу када користите полиакриламид, јер је неуротоксичан.
Посебан чешаљ се поставља у калуп за агарозни гел, а затим пажљиво уклања након што се учврсти. Овде се поставља фрагмент ДНК или други молекуларни узорци, који су прво помешани са посебном бојом за пуњење. Тхе пуњење боје је само да се прати кретање ДНК, јер другачије није видљиво.
Постоји и бунар који садржи оно што се назива а ДНК лествица или маркер. Ово служи као висококвалитетни образац са познатим величинама трака, за упоређивање величина са узорцима ДНК који се проучавају. Једном када се примени електрично поље, ови негативно наелектрисани молекули ће путовати кроз гел према позитивном крају.
Резултати електрофорезе у гелу
Једном када молекули пређу крај гела, време је за читање резултати електрофорезе у гелу. ЕтБр боја у гелу се лако веже за ДНК, отуда и његова употреба, а затим можете видети траке ДНК како флуоресцирају под УВ светлошћу.
Морате бити веома опрезни да не додирнете етидијум бромид, јер његов афинитет према ДНК такође значи да га може одмотати; због тога се сматра мутагеном. Сада су доступне новије, сигурније боје, иако су њихове цене више.
УВ светло открива интензитет гела електрофорезе у ДНК или другим молекуларним узорцима. Положај трака на гелу открива величину Фрагмент ДНК. Тхе интензитет појаса гел електрофорезе открива концентрацију молекула.
Сада можете упоредити траке ДНК у својим узорцима са узорком лествице ДНК. Познате величине трака лествице помоћи ће вам да одредите релативну величину ДНК коју проучавате.
Значај квалитетне електрофорезе у гелу
Електрофореза у гелу је коришћена у ДНК отисци прстију и форензика. Помогао је истраживачима да утврде информације о геномима многих врста. Коришћење висококвалитетних резултата гел електрофорезе је од суштинског значаја за ова важна поља.
Због тога је пресудно радити са висококвалитетним састојцима и водити велику пажњу при изради гелова. Неопходно је спречити контаминацију узорака ДНК РНК или протеинима.
Обавезно користите чисти пуфер, пажљиво сипајте гел тако да се јажице чешља равномерно формирају и држите све реагенсе на одговарајућој температури. Гел електрофореза Интензитет опсега треба да буде живахан и чист, без трагова друге ДНК у позадини и без мрља РНК или протеина који загађују гел.