ДНК
Деоксирибонуклеинска киселина и протеини. ДНК је организована у јединице назване гени, од којих свака кодира одређену секвенцу РНК или протеина. Гени се проучавају како би се научило о биолошкој структури и функцији, еволуцији, болестима и многим другим аспектима живих система. Да би се гени детаљно проучавали, ДНК мора бити изолована и пречишћена из ћелија које нас занимају.
Екстракција ДНК
Иако се ДНК из једне ћелије може извући и проучити, то није довољно за гледање голим оком. Да бисте добили количину довољну за намотавање, са више ћелија морате да радите, то је боље (много милиона).
Тачни протоколи се знатно разликују због јединствених карактеристика специфичних узорака, али општи кораци су хомогенизација, лиза, варење, одвајање и сакупљање. Поступак је најбоље изводити у малој (у зависности од величине узорка) стакленој или пластичној цеви.
Узорак је обично помешан или уземљен како би се ћелије темељито одвојиле једна од друге. Ово чини ћелијске састојке доступнијим реагенсима који следе. Затим се хомогенату дода детерџент или ензими за лизирање ћелијских мембрана (и нуклеарних мембрана ако су ћелије еукариотске) како би се ослободила ДНК. У овом тренутку, ДНК је окружена протеинима, липидима, угљеним хидратима, свим осталим што је било у ћелијама.
Даља ензимска пробава може бити потребна да би се протеини разградили како се не би везали за ДНК и ометали њено сакупљање. ДНК се одваја од остатка ћелијског садржаја додавањем хладног, чистог, етилног или изопропил алкохола. ДНК није растворљива у овим алкохолима, па ће се кондензовати да би покушала да смањи контакт са алкохолом. Кондензована ДНК се тада сакупља, обично центрифугирањем или намотавањем.
ДНК споолинг
Прикупљање ДНК намотавањем ефикасно је када се у поступку екстракције добије велика количина ДНК. Такође је одличан демонстрациони метод јер се јасно види импресиван сплет чисте ДНК.
Да би се намотала ДНК, корак одвајања мора бити пажљиво изведен. Ако претходно није био део смеше реагенса за лизу, раствору се мора додати концентровани раствор соли (натријум хлорид) пре корака додавања алкохола. Хладни алкохол полако се сипа са стране епрувете да би се створио слој на врху воденог раствора, избегавајући мешање. Ако се правилно уради, алкохол ће створити властити слој на врху сланог слоја. Затим долази до намотавања.
Да бисте сакупили ДНК из сланог слоја, пажљиво ставите стаклену шипку за мешање кроз слој алкохола док не додирне дно цеви. Полако завртите штап између прстију, док гледате интерфејс између два слоја. Ако је присутно довољно ДНК, она ће се скупити на међи између слојева и формирати млечно провидну масу. Завртите штап да бисте омотали ДНК око њега (то је део за намотавање) и извукли га из цеви. ДНК се може пренети у другу епрувету чистог алкохола ради складиштења или даље анализе.