Научници користе проточну цитометрију за разликовање различитих врста ћелија или микроскопских организама. То је алат који се користи у многим апликацијама, попут медицинске дијагностике или форензичке патологије. Иако је ову експерименталну технику прилично лако извести, добијена је анализа сложених података проточним цитометром је теже због више експерименталних фактора и / или цитометра параметри. Као таква, рутина је да се цитометријски подаци визуализују и анализирају помоћу софистицираних професионалних програма као што су ЦЕЛЛКуест или ФловЈо. Упознавање са техникама проточне цитометрије, машинеријом и софтвером је неопходно како би се разумели резултати које они дају експерименти.
Појасните циљ експеримента постављањем питања: "Које је питање или хипотеза истражено?" Ово ће бити потребан за прилагођавање сирових резултата одговарајућем формату и поставкама за даљу анализу коришћењем статистичке цитометрије софтвер. Направите све потребне промене како би се подаци приказивали са одговарајућим подешавањима (нпр. Позитивне ћелије, негативне капије, интензитет флуоресценције, популације ћелија итд.).
Нађи капије. Ћелије се могу груписати или једноставно посматрати кластерено на графикону густине или контурном дијаграму. Групе се често раздвајају у зависности од њиховог идентитета. Ако се једна група врло интензивно боји за одређени маркер или антитело, закључује се да сви чланови те групе имају идентитет одређеног типа ћелије, који изражава тај маркер. Уобичајено је да се пронађу ћелије које су позитивне на више од једног од ових маркера, а ове ћелије су обично интермедијер и означене су као „двоструко позитивне“.
Погледајте распршене слике. Начин на који се групе ћелија шире на расејаној парцели показатељ је величине ћелија. Ћелије са врло великим или великим расејањем су обично велике ћелије; међутим, они могу бити велики само зато што садрже висок удео цитоплазме, или могу бити високи јер имају врло велико језгро. Зависно од биологије која се истражује, ово ће се, наравно, веома разликовати од експеримента.
Погледајте бројеве. Прилагодите графиконе тако да приказују различите параметре на једној оси (обично Кс оси), а истовремено рачунајте на И оси. Ово указује на удео популације узорка који је позитиван за тај одређени параметар, као а пик ће се нормално уочити у позитивно обојеном узорку, који ће изостати из негативне контроле узорак.
Погледајте хистограме са више параметара. Прилагођавањем Кс-осе и И-осе сваком представља различити параметар који је био истражено током експеримента, могуће је дубље разумевање својстава узорка. На пример, постављањем Кс-оси на црвену флуоресценцију, а И-оси на зелену, могу се израчунати капије у облику квадрата за узорак да покаже четири регије квадранта у којима су ћелије присутне и обојене црвеном или зеленом флуоресценцијом, обе боје или ниједном све. То омогућава да се хетерогени узорак подели на његове саставне делове и да се сви видови који се преклапају визуализују и квантификују.
Референце
- „Анализа података проточне цитометрије“; Сусан Схарров; 1991
- „Проточна цитометрија: инструментација и анализа података“; Марвин Ван Дила; 1985
- „Протоколи проточне цитометрије“; Тереза и Роберт Хавлеи; 2004
О аутору
Палмер Овиоунг је магистар међународног пословања на Калифорнијском универзитету у Сан Диегу и Дипломирани уметник социологије са Калифорнијског универзитета у Санта Барбари и школовани је молекулар биолог. Слободни је писац од 2006. године. Поред писања, редовни је Форек трговац и Интернет продавац.
Пхото Цредитс
Полка Дот РФ / Полка Дот / Гетти Имагес
