Ензими су протеини који раде на смањењу енергије активације у хемијским реакцијама, а притом се не троше у реакцији. Биолошки, ензими су неопходни молекули који убрзавају реакције у метаболичким системима. Као резултат, кинетика ензима проучава брзину реакције ензима у различитим хемијским окружењима. Многи фактори утичу на брзину ензима. Концентрација супстрата, температура, инхибитори и пХ утичу на праг ензима у хемијској реакцији. Уз помоћ линеарних односа као што је Линевеавер-Бурк плот, можете пронаћи максималну стопу ензима.
Једноставност израчунавања Вмак у Линевеавер-Бурк Плот-у
Започните са цртањем Мицхаелис-Ментенове једначине да бисте добили криву хиперболе. Затим, употребите реципрочну вредност Мицхаелис-Ментенове једначине да бисте добили облик нагнутог пресретања активности ензима. Затим ћете добити стопу активности ензима као 1 / Во = Км / Вмак (1 / [С]) + 1 / Вмак, где је Во почетна стопа, Км је константа дисоцијације између супстрата и ензима, Вмак је максимална брзина, а С концентрација подлога.
Будући да једначина пресијецања нагиба повезује брзину с концентрацијом подлоге, можете користити типичну формула и = мк + б, где је и зависна променљива, м нагиб, к независна променљива, а б је и-пресретање. Пре одређеног рачунарског софтвера, цртали бисте линију помоћу милиметрског папира. Сада за израду једначине користите типични софтвер базе података. Дакле, знајући почетну брзину, Во и различите концентрације подлоге, можете направити праву линију. Цртеж линије приказује нагиб Км / Вмак и пресек и од 1 / Вмак. Даље, користите реципрочну вредност и-пресека за израчунавање Вмак активности ензима.
Употребе за Линевеавер-Бурк Плот
Инхибитори мењају максималну брзину активности ензима углавном на два начина: компетитивно и неконкурентно. Компетитивни инхибитор везује се за место активације ензима који блокира супстрат. На овај начин, инхибитор се такмичи са супстратом да би се везао за место ензима. Омогућавање високе концентрације конкурентног инхибитора осигурава везивање за место. Дакле, компетитивни инхибитор мења динамику ензимске брзине. Прво, инхибитор модификује нагиб и к-пресретање Км стварајући много стрмији нагиб. Међутим, максимална стопа, Вмак, остаје иста.
С друге стране, неконкурентни инхибитор се везује на другом месту од места активације ензима и не надмеће се са супстратом. Инхибитор модификује структурне компоненте места активације спречавајући везивање супстрата или другог молекула за место. Ова промена утиче на афинитет супстрата према ензиму. Неконкурентни инхибитори мењају нагиб и и-пресек Линевеавер-Бурк графикона, смањујући Вмак док повећавајући и-пресек са стрмијим нагибом. Међутим, пресретање к остаје исто. Иако је плот Линевеавер-Бурк користан на много начина, линијски плот има ограничења. На несрећу, парцела почиње да искривљује стопе при врло високим или ниским концентрацијама супстрата, стварајући екстраполације на парцели.
