Kako izračunati koncentracijo celic

Znanstveniki in tehniki morajo pogosto izračunati koncentracijo celic v suspenziji. Ko na primer bolniku odvzamejo kri v zdravniški ordinaciji, lahko laboratorij z določenimi metodami poišče količino belih krvnih celic v določeni količini krvi. To daje zdravniku veliko informacij o zdravju njenega pacienta, zlasti o njegovem imunskem sistemu in o tem, ali se bori z okužbo ali drugo boleznijo. Takšni testi lahko poiščejo številne druge celice v krvi, pa tudi hrbtenično tekočino in druge telesne tekočine, na primer število semenčic v semenu za namene plodnosti. Znanstveniki izračunavajo tudi koncentracije celic bakterij, kvasovk in drugih mikroorganizmov za številne namene, od ekoloških raziskav do industrijskih tehnologij. Eno najpogostejših tehnik poučujejo tudi v mnogih tečajih biologije na fakulteti in uporablja napravo, imenovano števec.

Preden lahko celična suspenzija preide v števec, bo morda treba razredčiti, ker lahko vsebuje na tisoče ali milijone celic. V tem primeru celic ni mogoče razumno prešteti. Za razredčenje vzorca s sterilno pipeto v epruveto, ki vsebuje 90 mikrolitrov razredčila, položimo deset mikrolitrov celične raztopine. Vrsta razredčila je odvisna od vrste celice. Dobro premešajte. Ta raztopina je zdaj desetkrat bolj razredčena kot začetni vzorec, zato je njen faktor redčenja 10

instagram story viewer
-1. Označi. To ponovite večkrat, vsakič s sterilno pipeto, dokler raztopina ni dovolj razredčena. Če ste jo razredčili drugič, je bila druga epruveta 100-krat bolj razredčena kot začetna raztopina, zato je bil faktor redčenja 10-2 in tako naprej.

Morda boste morali preizkusiti več razredčitev, da določite pravi faktor redčenja za štetje. Štelna komora je v bistvu zelo majhna, prozorna, pravokotna škatla z natančno globino in natančno rešetko na vrhu. Znan je tudi kot hemocitometer ali včasih hemacitometer. Cilj je, da je suspenzija dovolj razredčena, da se ob pregledu v števnici komore ne prekrivajo in se enakomerno porazdelijo po mreži. Razredčeno suspenzijo, ki vsebuje celice, pipetirajte v jamico v števcu, kjer se s kapilarnim delovanjem usede v mrežo. Številčno komoro postavite na mikroskopski oder in si jo oglejte pod majhno močjo.

Mreža vsebuje kvadratke, ki so narejeni iz še manjših kvadratov. Izberite približno štiri ali pet kvadratov ali toliko, kolikor jih potrebujete, da preštejete vsaj 100 celic, po vzorcu, ki ste ga izbrali, na primer štiri vogale in srednji kvadrat. Če so celice velike, so to lahko veliki kvadrati, če pa so celice majhne, ​​lahko raje izberete manjše kvadrate.

Specifična prostornina vsakega mrežnega kvadrata se lahko razlikuje glede na proizvajalca komore za štetje, pogosto pa je globina komore 0,1 milimetrov je površina velikih kvadratov 1 kvadratni milimeter, površina manjših kvadratov pa 0,04 kvadratnih metrov milimetrov. Večji kvadrati imajo torej prostornino 0,1 kubičnih milimetrov. Za ta primer predpostavimo, da ste v petih kvadratih skupaj prešteli 103 celice in da ste začetni vzorec razredčili, dokler faktor redčenja ni bil 10-2.

Če ima vsak mrežni kvadrat prostornino 0,1 kubičnega milimetra in jih je bilo preštetih pet, je bila celotna prostornina preštete komore 0,5 kubičnih milimetrov in 103 celice. Če bi ga podvojili na 1 kubični milimeter, bi to pomenilo 206 celic. En kubični centimeter ustreza 1 mililitru, kar je koristna meritev za tekočine. V kubičnem centimetru je 1.000 kubičnih milimetrov. Če bi torej obstajal kubični centimeter ali mililiter suspenzije, bi šteli 206.000 (206 x 1.000) celic. Takole je videti kot enačba:

Prostornina kvadrata mreže × število preštetih kvadratov = skupna prostornina preštete suspenzije

Število celic ÷ prostornina preštete suspenzije = število celic na milimetre v kocki

Število celic na milimetre v kockah × 1000 = število celic na mililiter

Upoštevati boste morali kakršno koli razredčitev, da bo začetna raztopina pod mikroskopom štetna. V tem primeru je faktor razredčenja 10-2. Za izračun začetne koncentracije raztopine:

Število celic na mililiter ÷ faktor razredčenja = koncentracija celic

V tem primeru je število celic na mililiter 206.000 in to deljenje z 10-2 (0,01) daje koncentracijo celic 20.600.000 celic na mililiter v začetnem vzorcu.

Teachs.ru
  • Deliti
instagram viewer