Kloniranje TA je preprosta in priročna metoda subkloniranja izdelkov z verižno reakcijo s polimerazo (PCR). "TA" je okrajšava za "timin" in "adenin". Ta tehnika kloniranja uporablja sposobnost timina, da se hibridizira v adenin v prisotnosti ligaz. V nasprotju s tradicionalno metodo subkloniranja se omejevalni encimi ne uporabljajo. Namesto tega se produkti PCR ojačajo z uporabo encimov Taq polimeraze.
Metoda
Metoda kloniranja TA uporablja končno transferazno aktivnost nekaterih previsov deoksiribonukleinske kisline na obeh koncih produkta PCR.
Za kloniranje tega produkta PCR v plazmidni vektor se uporablja linearni klonirajoči vektor z enojnimi, tremi previsi T-3 (3'-T), imenovan T-vektor. Produkt PCR se v tem razmerju zmeša v velikem deležu.
Zmesi dodamo DNA ligazo (T4 ligaza), ki omogoča, da se oba izdelka hibridizirata in združita.
Prednosti in slabosti
Kloniranje TA je priročna metoda subkloniranja izdelkov PCR v lineariziranem vektorju in je veliko preprostejša in hitrejša od tradicionalnih metod subkloniranja. Ker ta metoda ne uporablja restrikcijskih encimov, je mogoče klonirati izdelke brez lokacij restrikcijskih encimov.
Pomanjkljivost je, da so kompleti za kloniranje TA zelo dragi in je zato njihova uporaba omejena. Poleg tega ni usmerjenega kloniranja; zato je verjetnost kloniranja v nasprotno smer večja.
Kompleti za kloniranje TA
Več proizvajalcev prodaja komplete za kloniranje TA. Nekateri so Invitrogen, QIAGEN in Premier Biosoft.