Ko preizkušate vpliv pH na aktivnost encimov, morate spremeniti pH. Vendar lahko to storite na dobre ali slabe načine. Ne pozabite, kateri dodatni dejavniki lahko zmedejo učinke spreminjanja pH. V nasprotnem primeru dobljeni rezultati morda niso posledica spremembe pH, ampak kakšen drug dejavnik. Če boste vedeli, kako pravilno spreminjati pH in kateri dejavniki mešajo pH eksperimenta, boste lažje dosegli dobre rezultate in razumeli, zakaj vaši rezultati morda niso ravno takšni, kot ste pričakovali.
Spremeni samo eno stvar
Ko preizkušate vpliv pH na aktivnost encimov, spreminjajte le pH, medtem ko ohranjate konstanto drugih dejavnikov. Ti drugi dejavniki vključujejo koncentracijo encimov, koncentracijo substrata in temperaturo. Faktorji, ki ostanejo nespremenjeni, se imenujejo nadzorne spremenljivke. Nadzorne spremenljivke vam omogočajo, da ugotovite, da so rezultati aktivnosti encimov, dobljeni v vašem poskusu, posledica spreminjanja pH, neodvisne spremenljivke. Vedeti, katere dejavnike v eksperimentu ne smemo spremeniti, je enako pomembno kot vedeti, kateri faktor naj se spreminja, sicer bo težko sklepati, ali so rezultati dejansko posledica ene stvari, ki je bila preizkušen.
Izberite eno kislino ali eno bazo
PH raztopine lahko spremenimo z raztapljanjem različnih količin kisline ali baze v vodi. Eden od načinov za preizkus vpliva pH na aktivnost encimov je postopno dodajanje kapljic močne kisline ali močne baze v raztopino, ki vsebuje encim, in nato opazujemo točko, na kateri se encimska aktivnost upočasni oz ustavi. Kislina je opredeljena kot spojina, ki donira vodikov ion, imenovan proton (H +), baza pa kot spojina, ki da hidroksidni ion (-OH). Različne kisline in baze imajo različno število protonov ali hidroksidnih ionov. Vsi protoni ali hidroksidni ioni se ne dajo takoj, ko se kislini ali bazi doda raztopina, vendar število darovanih protonov ali hidroksidnih ionov spremeni pH z različnimi hitrostmi. Zato je dobro spremeniti pH v encimskem poskusu z uporabo samo ene vrste kisline ali ene vrste baze. V nasprotnem primeru se nenamerno dodajo druge spremenljivke.
Tudi tkiva spremenijo pH
Nekateri laboratorijski poskusi, ki preučujejo encimsko aktivnost, vključujejo drobljenje svežega tkiva za sproščanje encimov iz celic in nato dodajanje substrata za merjenje encimske aktivnosti. Sveže tkivo vsebuje kri. Zaradi prisotnosti encimov v krvi, ki spremenijo plin ogljikov dioksid, ki se v krvi raztopi v ogljikovo kislino, lahko tkivo samo vpliva na pH. Tako je v poskusih, ki vključujejo encimsko aktivnost v svežem tkivu, koristno izpiranje krvi v čaši z mrzlo vodo pred mletjem tkiva. To bo zmanjšalo nenamerno spremembo pH zaradi tkiva, tako da bo mogoče proučiti namensko spremembo pH.
Naj bodo velikosti enake
Kot smo že omenili, je koncentracija encimov nadzorni dejavnik, ki se ne sme spreminjati pri testiranju vpliva pH na aktivnost encimov. Vendar eksperimentalni postopki še vedno bistveno spreminjajo koncentracijo encimov na subtilen način. Če uporabljate čisto raztopino encimov, potem ohranite konstantno koncentracijo encimov. V poskusih, pri katerih je encim iz svežega tkiva, na primer koščki krompirja, koščki rastlin ali koščki jeter, velikost kosov spremeni količino encima v vsaki epruveti. Tako bo koristno, da se kosi tkiva razrežejo čim bolj enakomerno. To je še en primer, kako vedenje, česa ne spremeniti, in zakaj se je težko, da se sprememb ne izognemo v celoti, pomaga razlagati rezultate spreminjanja faktorja, kot je pH.