Tekoča kromatografija z visoko zmogljivostjo je tehnika za laboratorijsko analizo zmesi. Gre za učinkovito vrsto kromatografije, ki za potiskanje vzorca mešanice skozi kolono uporablja visok pritisk in ne le gravitacijo. Vzorec se vbrizga, nato pa črpalka, ki vsebuje velike količine tlaka, pomaga premikati vzorec po polnjenem stolpcu, kjer je ločen na posamezne komponente. To ločitev nato analizira detektor, da se dobijo rezultati.
Mesto injiciranja
Za vbrizganje v HPLC je treba vzorec najprej raztopiti v polarnem tekočem topilu, po možnosti takšnem z znanimi HPLC spektri, da lahko njegove podatke ločimo od vzorcev. Tekoča raztopina, ki vsebuje vzorec, se da v instrument in pošlje v kolono. Dejansko mesto mesta injiciranja je odvisno od znamke instrumentov. V večini primerov je postopek injiciranja avtomatiziran, v nekaterih primerih pa mora laboratorijski delavec injicirati vzorec z majhno iglo brizge.
Komponenta črpalke
Komponenta črpalke enote HPLC je potrebna, ker zagotavlja tlak, ki vzorec poganja skozi kolono. Moč črpalke se spreminja, vendar močna lahko povzroči tlak do 6000 psi ali kilogramov na kvadratni palec, ki se uporabi po vbrizganju vzorca. To omogoča, da vzorec hitreje in učinkoviteje prehaja skozi kolono, kot če bi kapljal skozi samo gravitacijsko silo.
Opis stolpca
Povečana hitrost vzorca, ki ga skozi kolono prenaša črpalka, omogoča uporabo druge vrste kolone kot tiste, ki se uporabljajo pri preprosti tekočinski kromatografiji. Embalažni material v koloni ima lahko veliko manjšo velikost delcev, kar poveča površino in tako pomaga interakcijam vzorca s kolono. Večina stolpcev HPLC deluje s polarnostjo. Vzorec se raztopi v polarnem topilu, kolono pa sestavljajo večinoma nepolarni ogljikovodiki. Polarni deli molekule vzorca gredo skozi kolono zelo hitro, ker so v prvi vrsti v interakciji z topilo, medtem ko se nepolarne komponente vzorca zadržijo v koloni in tvorijo šibke interakcije s kolono sestavnih delov. Zato se komponente vzorca odcepijo iz kolone po vrstnem redu od najbolj polarne do najbolj nepolarne.
Funkcija detektorja
Detektorji se razlikujejo tudi glede na vrsto uporabljenega HPLC instrumenta. Vendar večina deluje na enak osnovni način. Vir ultravijolične svetlobe sije na ločene sestavne dele vzorca, ko se spustijo iz kolone. Večina organskih spojin absorbira določeno količino svetlobe, zato lahko detektor, ko gre mimo uporabljenega svetlobnega žarka, pobere, koliko svetlobe se absorbira. Detektor zabeleži tudi čas zadrževanja komponent glede na vrstni red, v katerem izstopajo iz kolone. Ta izhod se lahko nato analizira na podlagi površine vrha, da se določi natančna narava komponent vzorca.