Izolačné techniky pre doštičku s pruhmi

Aj keď ich nie je možné vidieť voľným okom, baktérie sú všade. Existujú v potrave, pôde, vode, povrchoch v našich domovoch a v a na našich telách. Baktérie všeobecne existujú v zmiešaných populáciách. Izolácia konkrétnej baktérie z iných bakteriálnych druhov v danej vzorke umožňuje mikrobiológom študovať jej štruktúru a funkciu, vlastnosti použité pri jej identifikácii. Mikrobiológovia často izolujú baktérie pomocou jednej z niekoľkých techník pruhovej platne.

Náradie

Na prenos mikroorganizmov sa používa očkovacia slučka. Skladá sa z nichrómu alebo platinového drôtu s malou kruhovou slučkou na jednom konci. Druhý koniec je rovný a zasúva sa do rukoväte. K dispozícii sú tiež plastové jednorazové očkovacie slučky. Baktérie sa dajú izolovať, iba ak rastú. Mikrobiológovia pestujú baktérie na izoláciu pruhovej doštičky v plytkých, okrúhlych Petriho miskách naplnených pevným médiom, ktoré sa nazýva agar. Agar napodobňuje prostredie, v ktorom baktérie prirodzene rastú. Misky naplnené médiom sú sterilné a zakryté, aby sa zabránilo množeniu nežiaducich organizmov. Počas izolácie platne s pruhmi sa očkovacia slučka opakovane sterilizuje v plameni Bunsenovho horáka.

Princíp

Technika pruhovej doštičky je najobľúbenejšou metódou na izoláciu špecifických baktérií zo vzorky obsahujúcej zmes mikroorganizmov. Táto technika v podstate riedi počet organizmov a znižuje ich hustotu. Umožňuje mikrobiológom rozlíšiť a izolovať jednotlivé bakteriálne kolónie. Kolónia je viditeľný zhluk baktérií. Všetky baktérie v jednej kolónii pochádzajú z tej istej bakteriálnej bunky. Jednotlivé kolónie sú teda „čisté“ kolónie. Čistá kolónia sa prenesie na inú platňu, aby sa získala čistá kultúra pozostávajúca z jedného typu baktérií.

Postup

Po správnom vykonaní izolácia pruhovej doštičky zriedi vzorku a umožňuje jednotlivým bakteriálnym bunkám vyvinúť sa do izolovaných kolónií. Mikrobiológ začína sterilizáciou očkovacej slučky v plameni. Ochladí slučku tak, že sa jej dotkne agaru, potom ju ponorí do vzorky a roztiahne ju tam a späť, aby zakryla časť platničky. Sterilizuje slučku, ochladí ju a potiahnutím naočkuje druhú susednú časť platničky slučku cez prvý úsek niekoľkokrát a druhý úsek pokrývať cikcakom pohyb. To zachytí malé množstvo baktérií z prvej časti a prenesie ich do druhej časti. Počet opakovaní tohto základného postupu závisí od použitej metódy pruhovej platne. Napriek tejto metóde sa pôvodná vzorka použije iba na naočkovanie prvého úseku platne.

Metóda pruhovej platne

Metódy platní s pruhom sa líšia podľa počtu pruhov agarových rezov. Metóda T-pruhu využíva tri sekcie: hornú polovicu a dve rovnako veľké spodné sekcie. Počiatočné inokulum sa umiestni do hornej polovice platne. Baktérie sa sťahujú z hornej časti do jednej zo spodných častí a potom z tejto spodnej časti do druhej. Pri kvadrantovej metóde sú pruhované štyri rovnako veľké úseky. Metóda kontinuálneho pruhu zvyčajne zahrnuje naočkovanie hornej polovice platne a jej otáčanie o 180 stupňov, a naočkovaním druhej polovice platne bez sterilizácie slučky alebo vyťahovania baktérií z predchádzajúcej oddiel.

  • Zdieľam
instagram viewer